原核生物的基因重组.pptVIP

证实接合过程需要细胞间的直接接触的 “U”型管实验（ Bernard Davis，1950 ） 第29页，共42页，编辑于2022年，星期五 2. 能进行接合的微生物种类 主要在细菌和放线菌中存在。 在细菌中，G－ 细菌尤为普遍，如E. coli、沙门氏菌属、志贺氏菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、弧菌属、固氮菌属和假单胞菌属等； 放线菌中，以链霉菌属和诺卡氏菌属最为常见，其中研究得最为详细的是天蓝色链霉菌（Streptomyces coeilcolor ）。 在不同属的一些菌种之间也可发生接合现象，如大肠杆菌与鼠伤寒沙门氏菌间或沙门氏菌与痢疾志贺氏菌间。 在所有对象中，接合现象研究得最多、了解得最清楚的是E. coli 。E. coli 是有性别分化的，决定性别的是其中的F质粒，F质粒还是合成性菌毛基因的载体。 第30页，共42页，编辑于2022年，星期五 第1页，共42页，编辑于2022年，星期五 基因重组（gene recombination）： 将两个不同性状个体的基因通过一定的方式转移到一起，并发生重新组合，产生新的遗传性状的过程，称为基因重组(gene recombination)或遗传重组。 重组：遗传物质在分子水平上发生的交换； 杂交：在细胞水平上遗传物质的交换. 杂交必然包含着重组，但重组不仅限于杂交这一形式。 第2页，共42页，编辑于2022年，星期五 原核生物的基因重组类型 4种形式：1）转化 2）转导 3）接合 4）原生质体融合 第3页，共42页，编辑于2022年，星期五 一、 转化（transformation） 定义：受体细胞直接吸收供体细胞的DNA片段, 并与其染色体同源片段进行遗传物质交换，从而使受体细胞获得新的遗传性状的现象。 转化子（ transformant）：经转化后出现了供体性状的受体细胞称为转化子，即转化成功的菌落。 目前已知有二十多个种的G+和G-细菌具有自然转化的能力 此过程可以发生在土壤和海洋环境中，可能是自然界遗传交换的重要方式。 第4页，共42页，编辑于2022年，星期五 自然遗传转化（natural genetic transformation） 人工转化（artificial transformation） 感受态细胞（competent cell） ：具有摄取外源DNA能力的细胞 1. 感受态 感受态：是指受体细胞最易接受外源DNA片段并能实现转化的一种生理状态。一个细菌能否出现感受态是由其遗传性决定的，但受环境条件的影响也很大，因而表现差别很大。 感受态因子：调节感受态的一类特异蛋白，它包括三种主要成分：膜相关DNA结合蛋白、细胞壁自溶素和几种核酸酶。 自然感受态与人工感受态的不同？ 自然感受态的出现是细胞一定生长阶段的生理特性 （如肺炎链球菌的感受态出现在对数生长期） 受细菌自身的基因控制 人工感受态则是通过人为诱导的方法，使细胞具有 摄取DNA的能力，或人为地将DNA导入细胞内。 （该过程与细菌自身的遗传控制无关！） 第5页，共42页，编辑于2022年，星期五 进行自然转化，需要二方面必要的条件： （1）建立了感受态的受体细胞 （2）外源游离DNA分子 第6页，共42页，编辑于2022年，星期五 感受态的机理研究： 局部原生质体化假说： 处于感受态的细胞局部失去了细胞壁，使外源DNA能顺利经膜进入菌体。 酶受体假说： 受体细胞表面出现了一种能结合DNA并使之进入细胞的酶。 第7页，共42页，编辑于2022年，星期五 2. 转化模型 （1）转化因子 本质是离体的DNA片断或质粒DNA 。转化因子进入细胞前还会被酶解成更小的片段，约8kb。在不同的微生物中，转化因子的形式不同，dsDNA,ssDNA. 革兰氏阴性的嗜血杆菌中，细胞只吸收dsDNA形式的转化因子，但进入细胞后需经酶解为ssDNA，才能与受体菌的基因组整合； 革兰氏阳性的链球菌和芽孢杆菌中，dsDNA的一条链必须在胞外降解，只有ssDNA形式的转化因子才能进入细胞。 但不管何种情况，最易与细胞表面结合的仍是dsDNA。 由于每个细胞表面能与转化因子相结合的位点有限（如肺炎链球菌约10个），因此，从外界加入无关的dsDNA就可竞争并干扰转化作用。 质粒D