抗肿瘤药物的筛选方法.pptVIP

Rhm123累积实验 Control Verapamil 5 mM Drug 1.25 mM Drug 2.5 mM Drug 5 mM 第62页，共105页，编辑于2022年，星期一 6. 抗肿瘤侵袭和迁移实验 转移是恶性肿瘤的重要特征 肿瘤的迁移是一个多阶段的复杂过程，Liotta等提出肿瘤侵袭和转移的三步学说，即粘附、降解和移动。粘附是肿瘤细胞侵袭的起始，肿瘤细胞通过表面特定受体与基底膜的层粘连蛋白、纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原等相粘连，然后在蛋白水解酶和相关因子的作用下，侵袭基底膜，降解细胞外基质肿瘤细胞一旦突破基底膜，逃避免疫监视，即在基质内较快侵袭性生长并发生转移。 阻断其中任何一个过程，都可以抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭 第63页，共105页，编辑于2022年，星期一 １）粘附实验 　原理：将Matrigel铺在96孔板上，能形成与天然基底膜极为相似的基底膜结构，可以有效地在体外模拟肿瘤细胞的粘附过程。 方法：将Matrigel包被96孔板，过夜，将药物处理后的细胞接种在96孔板，1h后，弃去未粘附的细胞，加入MTT培养，测定吸光度。 结果： 细胞粘附 抑制率（%） = （ OD对照-OD实验） OD对照 X 100% 第64页，共105页，编辑于2022年，星期一 2）细胞划痕实验（运动能力检测） 方法：细胞按30000个/孔密