植物基因的克隆原理与技术.pptVIP

利用λ噬菌体构建基因组文库 第127页，共158页，编辑于2022年，星期一 利用考斯质粒构建基因组文库 第128页，共158页，编辑于2022年，星期一 利用YAC构建基因组文库 第129页，共158页，编辑于2022年，星期一 cDNA文库 cDNA文库(completement DNA Library)：某生物基因组转录的全部或部分mRNA经反转录产生的各种cDNA片段，分别与载体重组而存在于一种受体的群体，即cDNA基因(部分)文库。 第130页，共158页，编辑于2022年，星期一 基因组文库 包含该生物基因组DNA全部的序列； 是具有生物种属特异性的。 cDNA文库 已经过剪接、去除了内含子的cDNA； 具有组织细胞特异性。 第131页，共158页，编辑于2022年，星期一 cDNA文库的构建 载体cDNA片段的制备 分离细胞总RNA； 以mRNA为模板，合成cDNA第一链； 双链cDNA的合成。 第132页，共158页，编辑于2022年，星期一 mRNA纯化的方法： 以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效。 原理： 利用mRNA 3’末端含有Poly（A+）的特点，在RNA流经寡聚（dT）纤维素柱时，在高盐缓冲液的作用下，mRNA被特异地结合在柱上，当逐渐降低盐的浓度时或在低盐溶液和蒸馏水的情况下，mRN