分子生物学基础实验.ppt

;分子生物学基础实验;实验要求;一、? 质粒DNA小量制备的实验原理;作为基因工程的载体必须具备下列条件;质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1－120kb之间，具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。;质粒在细胞内复制的两种类型;分离质粒DNA的三个基本步骤:;整理ppt;质粒DNA的相对分子量一般在106－107范围内，如质粒pBR322的相对分子质量为2.8×106，质粒pUC19的相对分子质量为1.7×106。 在细胞内，共价闭环DNA（covalently closed circular DNA，简称cccDNA）常以超螺旋形式存在。如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫作开环DNA（open circular DNA，简称ocDNA）。在电泳时，同一质粒如以cccDNA形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度快，因此在本实验中，自制质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。 ;二、实验目的与内容;三、实验材料和试剂;高压蒸汽灭菌锅;超净工作台;台式高速离心机;恒温摇床;