分子生物学试验石耀华.ppt

分子生物学实验;实验内容;实验一 动物基因组DNA提取 ; 通过液氮研磨等将组织块打碎为单细胞或者小的细胞团，采用去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)等破坏细胞的膜结构，使细胞膜和核膜蛋白溶解，染色质的核蛋白释放，DNA游离出来。利用蛋白酶K在50 - 55℃下消化蛋白质组分。核酸是极性化合物，溶于水而不溶于酚、氯仿和乙醇等有机溶剂，而蛋白质具有苯酚、氯仿相似相溶性，而且苯酚和氯仿可以使蛋白质变性。;因此，可以采用苯酚/氯仿抽提蛋白酶消化后的匀浆液，然后根据苯酚/氯仿和水的密度差???进行离心分层，蛋白质分子溶于苯酚/氯仿相，而DNA溶于水相。水相密度较小，位于上层；苯酚/氯仿相密度较大，位于下层。吸取上层的水相而放弃下层苯酚/氯仿相，从而除掉细胞内蛋白质等。进而利用核酸不溶于醇的性质将DNA从水溶液中沉淀分离出来，去除盐分等，再用适量的灭菌水或者TE溶液溶解;一、实验器材 水浴锅，离心机，移液器，解剖盘，剪刀，镊子，浮子，离心管架，1.5 ml离心管，10 μl、200 μl 和1 ml吸头及吸头盒，记号笔等 二、试剂 抽体液STE [10 mmol/ L Tris·HCl(pH 8.0), 10 mmol/ LEDTA (pH 8. 0), 100 mmol/ L NaCl，1% 2-巯基乙醇]，10% SDS，蛋白酶K(20 mg/ml)，苯酚/氯仿