常见肠道致病菌的分离与鉴定.pptxVIP

常见肠道致病菌的分离与鉴定前 言腹泻一般分为以下几类：1．吸收不良性腹泻2．分泌性腹泻（产肠毒素性腹泻）3．侵袭性腹泻 外广谱抗菌药物、放疗、化疗药物及激素类药物的长期不规范应用以及各种侵入性操作也可以引起继发性肠道感染。粪便的细菌学检验是诊断感染性腹泻的重要手段。01标本采集和运送目录02细菌学检验03报告与解释1标本采集和运送重点提示采集指征标本的采集标本的运送标本的验收采集指征排便次数≥3次/日，粪便性状异常（稀便、水样便、粘液脓血便）排便时有腹痛、下坠、里急后重、肛门灼痛等症状发热、恶心、呕吐、食欲明显降低及全身不适等症状标本的采集1．尽可能在发病急性期和抗生素治疗前进行，以提高致病菌的检出率2．每天采集1份标本，连续3天，共采集3份标本采集方法1．自然排便采集　挑取有粘液、脓血部位的粪便或液体粪便取絮状物2～3ml，放置于无菌容器内，及时送检2．直肠肛拭采集　适用于排便困难患者或婴幼儿，置于卡-布（Cary-Blair）运送培养基或磷酸盐甘油缓冲液（pH7．0）中送检标本的运送1．标本采集后应尽快送检　室温保存≤2小时2．特殊细菌　艰难梭菌培养标本在4℃环境≤ 24小时；弯曲菌与弧菌的标本需加入CaCl2(100mg/L)3．置于运送培养基中的直肠拭子保存时间室温≤ 24小时标本验收 检查申请单信息填写是否完整、正确，包括标本采集时间、采集方式、抗生素使用情况、标本量是否足够、标本容器有无渗漏等标本拒收1．粪便标本放置时间超过2小时2．成形粪便或粪便标本混有尿液3．粪便标本量过少、干涸或保存不当4．直肠拭子未置于运送培养基中应及时与临床医师联系，说明原因，要求重新留取标本送检2细菌学检验重点提示 检验程序 检验方法 显微镜检查 培养和鉴定粪便或肛拭标本细菌鉴定药敏试验需氧培养根据临床特殊要求最终报告SS、XLD、麦康凯、血平板35℃培养18～24小时分离弯曲菌分离艰难梭菌分离弧菌分离致病大肠埃希菌O157观察菌落特征、涂片染色Camp-BAP血琼脂35℃微需氧培养48小时CCFA平板和厌氧血琼脂平板37℃厌氧培养48小时山梨醇麦康凯平板TCBS平板观察菌落特征、涂片染色生化反应初步鉴定观察菌落特征、涂片染色血清学鉴定血清学鉴定检验程序一、显微镜镜检 粪便标本含有大量的正常菌群，大部分情况下仅依靠染色性和形态很难分辨是否为病原菌，因此一般情况下粪便标本无需做涂片检查。仅在怀疑为霍乱弧菌、艰难梭菌、结核分枝杆菌感染以及菌群失调引起的腹泻时才进行显微镜检查不染色标本1．霍乱弧菌感染 标本呈米泔样或洗肉水样，镜检发现逗点状或弯曲状的弧菌，呈流星样穿梭，运动活泼。加入O1群或O139群霍乱弧菌多价诊断血清，大于80%的细菌停止运动或运动明显减弱2．弯曲菌感染 呈S形、螺旋形并快速、拧塞样或投镖样运动的细菌3．酵母样真菌感染 高倍镜发现光亮的卵圆形孢子或假菌丝染色标本霍乱弧菌 鱼群状排列的杆状或弧形革兰阴性杆菌空肠弯曲菌 细小、长而弯曲，呈S形或螺旋形、海鸥状的革兰阴性弧菌艰难梭菌 革兰阳性粗大杆菌、无荚膜、卵圆形芽胞位于菌体一端同时伴有炎症细胞酵母样真菌 瓜子状革兰阳性孢子或假菌丝结核分枝杆菌 抗酸染色发现红色抗酸杆菌二、培养与鉴定 医院中引起的腹泻一般不会是感染了食源性病原菌引起，故对于住院超过3天的患者的粪便标本不进行常规培养，除非是为了分离艰难梭菌和测定毒素以诊断抗生素相关性腹泻。1．沙门、志贺菌属菌培养 黏液、脓血便接种于SS琼脂平板或XLD琼脂平板和麦康凯（MAC）琼脂平板（或中国蓝琼脂平板）以及血平板，35℃孵育18～24小时，挑取不发酵乳糖菌落，至三糖铁琼脂初步观察生化反应并进行血清学凝集试验。可根据生化反应结果初步判断细菌菌属，再根据血清学鉴定结果鉴定至种2.肠病原性大肠埃希菌 引起腹泻的大肠埃希菌一般有5种类型，即产毒素大肠埃希菌（ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希菌（EHEC）以及肠聚集性大肠埃希菌（EAggEC）。粪便标本接种于MAC或中国蓝琼脂平板、显色培养基及SMAC平板，35°C培养18~24小时，挑取乳糖发酵（EIEC不发酵或迟缓发酵）菌落穿刺接种三糖铁琼脂和尿素动力靛基质培养基进行初步生化鉴定，并进行血清学分型。一般为检测EHEC，大便标本可增加接种于山梨醇-麦康凯琼脂平板（含1%山梨糖醇代替乳糖），EHEC不发酵山梨醇呈无色，而其他大肠埃希菌能发酵呈红色，借此可快速分离处EHEC。3.空肠弯曲菌 取明显病变部位的粪便接种于弯曲菌选择培养基（Camp-BAP血琼脂），或采取CEM空肠弯曲菌增菌培养基43°C微需氧气环境培养18~48小时后再转种Camp-BAP血琼脂。培养物置43°C微需氧环境培养24~48小时后观察菌落特征（非溶血、扁平