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生物制品生产用动物细胞制备及检定规程 . 生物制品生产用动物细胞制备及检定规程 Requirements for Preparation and Control of Animal Cell Substrates Used for Production of Biologics 本规程适用于生产和/或检定疫苗等生物制品的细胞培养，其中包括二倍体细胞、传代 细胞和原始细胞培养。本规程对这些细胞的性质、质量及安全性检定提出了明确要求。 A 对各类细胞培养总的要求 1 细胞库的建立 来自人或动物的细胞，已经通过全面检定，并得到国家药品管理当局批准，方可用于生 物制品生产及检定。 1.1 原始细胞库 由一个原始细胞群体，发展成细胞系（株）或经过克隆培养而形成拘泥的细胞群体，通 过检定证明适用于生物制品生产及检定。为了保证能持续使用而建立原始细胞库。目的是使 得制品每一生产周期，都能提供一个已标定好的相同质量的细胞源。因此，在特定条件下由 有一定数量、成分一致的细胞，按一定量均匀分装于安瓿，于液氮或-100℃以下冻存备用， 即为原始细胞库。 1.2 主细胞库（MCB） 取原始细胞种子，通过相应方式进行细胞传代，增殖一定数量细胞，将所有细胞均匀混 合成一批，定量分装安瓿，保存于液氮或-100℃以下备用。这些细胞必须以其自身的特定质 控要求进行全面检定，全部合格后即为主细胞库，为建立工作细胞库用。 1.3 工作细胞库（WCB ） 工作细胞库的细胞由主细胞库细胞传代扩增而来。主细胞库之细胞经传代增殖，达到一 定代次水平的细胞，全部合并成一批均质细胞群体，再按要求的细胞数量分装安瓿，保存于液 氮或-100℃以下备用。冻存时细胞的传代水平须确保细胞复后传代增殖的细胞数量能满足生 产一批或一个亚批产品。此时传代的水平必须在该细胞用于生产限制最高代次之。工作细胞库 细胞，必须按该细胞的检定要求，逐项进行全面检定，合格后方可用于生产。 1.4 生产用细胞培养 取出冻存的工作细胞库中一个或多个安瓿，混合后培养，传递一定代次后供生产制品使 用。其代次不得超过对该细胞用于生产的最高限制代次。从工作细胞库取出的细胞种子增殖出 来的细胞，不再回冻保存和再用于生产。 1.5 体外培养细胞龄的计算 二倍体细胞龄以细胞群体倍增计算，以每个培养容器细胞群体细胞数为基础，每增加一倍 作为一世代，即 1 瓶细胞传 2 瓶（1：2 分种率）再长满瓶为一世代；1 瓶传 4 瓶（1：4 ）为二 . 生物制品生产用动物细胞制备及检定规程 . 世代；1 瓶传 8 瓶（1：8 ）则为三世代。生产用细胞龄限制在细胞寿命期限的前2/3 。 传代细胞系则以一定稀释倍数进行传代，每传一次为一代。依据每个细胞系的时间经验 数据，确保细胞质量及安全，确定生产使用细胞最后限制代次。 有的原始细胞可以传少数几代（一般不应超过 5 代），尚可用于生产，但要以该细胞生 长特性及对病毒繁殖敏感性不发生改变为基础。 2 生产管理 2.1 细胞生产质量管理 细胞培养操作必须按照 GMP 要求，防止污染。在生产区不能进行非生产用细胞微生物 的操作，生产人员要定期检查身体。在同一工作日于操作细胞之前，不得操作或接触有感染 性的微生物或动物。用于制品生产的培养物中不准加青霉素或 β-酰胺（β-Lactam）抗生素。 虽允许少量使用其他抗生素，但最好不使用任何抗生素。 2.2 原材料的选择 各种类型细胞的供体材料均不应有任何外源因子污染。二倍体细胞的供体包括胎儿的父 母应为无传染性疾病和严重的遗传病，也无不确定病因的疾病。 培养细胞用牛血清，来源地区应没有牛脑海绵体脑病的健康牛群，应检查无外源因子污 染方可使用，应符合《中国生物制品主要原辅材料质控标准》中牛血清的有关规定。 消化细胞用胰蛋白酶应进行检测