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实验八 革兰氏染色法
实验八革兰氏染色法
实验八革兰氏染色
实验八革兰氏染色法
（参见实验教材第9页）
了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。
土壤中的微生物、革兰氏染色溶液（草酸铵结晶紫、碘溶液、95%酒精、藏红花）、载玻片、接种环、无菌水、显微镜、雪松油、二甲苯、擦镜纸。
按无菌操作要求，在酒精灯火焰旁进行
在干净干燥的玻片边缘滴一滴无菌水，用接种环取少量细菌，与水滴充分混合；将其涂抹在载玻片的中心，形成薄而均匀的细菌膜；
2.干燥：于空气中自然干燥
3.固定：将玻片通过火焰1-2次，使细菌膜牢固地粘附在玻片上；
（1）初染：在菌膜上加草酸铵结晶紫一滴，约1分钟，水洗；
（2） 媒染：在细菌膜上滴一滴碘溶液约1分钟，用水冲洗；
（3）脱色：将载玻片上面的水甩净，用95％酒精滴洗菌膜至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约30秒钟，立即用水冲净酒精；
（4） 复染：用藏红溶液染色1分钟，用水冲洗。
5.干燥：将载玻片上的水吸干或于空气中自然干燥
6.显微镜检查：将载玻片放在显微镜台上，按低倍镜、中倍镜、高倍镜、油镜顺序观察。
革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
实验后处理：
①先用擦镜纸将油镜头上的油擦去；用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次；再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。
② 用废纸擦拭载玻片上的雪松油，然后用沾有少量二甲苯的纸擦拭载玻片，然后用洗涤液浸泡在盆中。
1．结果：绘出你所观察到的细菌的形态图，并说明它们是革兰氏阴性菌还是革兰氏阳性菌。
2.思考问题：从一次染色到二次染色，哪一步是染色成败的关键？
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