第4章动物细胞工程细胞培养.pptx

第二篇 动物细胞工程第4章 细胞培养;;第4章 细胞培养;动物细胞与组织培养（cell and tissue culture）是动物细胞工程的重要技术基础。 动物细胞与组织培养是指从活的机体中取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术。;组织培养的概念 组织培养这一名词实际上是一个通用名词，习惯上泛指所有的体外培养。根据培养物的不同可概括为三个不同概念：细胞培养、组织培养和器官培养。;A：细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。;B：组织培养：将活体的一小片组织放在盛有培养液的玻璃或塑料培养器皿中，待组织块粘着后，沿底面平面移动生长的过程称为组织培养。 从组织块中生长出来的仍然是细胞，细胞在生长的同时也发生移动，至使组织培养难以长时间维持其原有结构，结果也就成了细胞培养。;C：器官培养：是指采取某些措施使器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的培养技术。;体外培养的种类;二、 细胞培养的现实意义; ;三、细胞培养技术的优点;; ;3. 研究的样本可以达到比较的均一 通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性，属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。;4. 研究内容便于观察、检测和记录 ;5.研究的范围比较广泛 学科多： 细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等 对象广： 各种动物：低等动物--高等动物--人类 一种动物：不同年龄-- 不同组织-- 正常或异常（肿瘤--）;6.研究的费用相对较经济 可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。;四、细胞培养的缺点; 现在人工模拟体内环境的技术已经很高, 但人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同。 当细胞被置于体外培养后, 生活在缺乏动态平衡的环境中, 时间久了，必然发生变化。; 因此，对于体外培养的细胞，应该把他们视作一种既能保持动物体内原细胞一定的性状、结构和功能又具有某些改变的特定的细胞群体，而不能将之与体内的细胞完全等同。;五、细胞培养的工作原则;有标准化的工作方法。 培养用的液体极多（如培养液、胰蛋白酶、HANKS液及抗菌素等），应由专人负责，并保证做到按规程行事，配制浓度准确，灭菌可靠，所有配好的溶液瓶上都要标明名称、浓度、消毒与否和制备日期等。 一切培养用品都要有固定的存放点，避免杂乱无章，其中尤其重要的是：培养用品与非培养用品应严格分开，已消毒品与未消毒品应分别存放。 ;4.1 组织培养的细胞生物学 ---培养细胞的生物学特征;一、体内外细胞的差异和分化;;1. 与体内主要不同 相对孤立、相对单一， 缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响。 ;2. 主要表现 失去原有组织结构和细胞形态 分化减弱或不显 细胞趋向单一化 3. 提示 要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。;（二）培养细胞的分化;二、培养细胞形态分类;体外细胞培养物的生长类型 ;贴壁(粘附)型细胞 ;培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。 粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞。; 细胞在体内、外粘附方式存在差异： 体内：粘附是全方位 外形具有复杂的立体特征。 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面 外形一般与体内时明显不同。 按照培养细胞粘附生长时的主要形态，可分为几大类型： ;根据粘附生长时形态的不同，主要分为4类： 上皮细胞型 成纤维细胞型 游走细胞型 多形型细胞 ;1，上皮细胞型 ;生长特点： 易相连成片 相靠—紧密相连—成薄层— 铺路石状 生长时呈膜状移动 很少脱离细胞群而单个活动;2，成纤维细胞型 ;生长特点： 排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片， 细胞—细胞接触易断开而单独行动。 游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。;;;贴附生长型--类型;培养细胞形态不稳定血清 Hela 高血清 低血清 成纤维细胞样 上皮样细胞