色层分离法生物分离工程.pptVIP

装 置 ⑴泵 ⑵混合器 ⑶层析柱 ⑷检测器 ⑸记录仪 ⑹分部收集器 装　　　柱 调糊:50%(缓冲液＋介质) 一次连续加入悬胶液 打开出口阀:层析剂沉降 排除空气 检查均匀度 上样 样品处理: (1)溶解 A 调整浓度 B 盐 C pH (2) 过滤:除去不溶物 流速:依照样品浓度与吸附速度而定 上样量:80%吸附容量 淋洗(去除残留在介质中的杂质) 盐浓度 pH 表面活性剂(0、1-0、5%) 淋洗体积:依照流出液杂蛋白浓度而定 防止产物丢失又要除去杂质 洗脱方法 按操作方式 a 恒定洗脱 (isocratic elution) b 分步洗脱 (stage elution) c 梯度洗脱 (gradient elution) 按洗脱机理 专一性洗脱(specific elution) 非专一性洗脱(nonspecific elution) 添加剂:乙二醇, NaCNS 、脲素、盐酸胍 洗脱体积:5倍床体积 恒定洗脱 分 步 洗 脱 (c) 梯度洗脱 清洗与再生 弱酸:HAC 碱:氨水 促溶剂:1-3M KCNS、 6-8 M 尿素、 6 M盐酸胍 极性溶剂:20% 乙醇 表面活性剂:吐温-80 缓冲液平衡 思 考 题 1 理解概念:解离常数,分离因素,阻滞因子,理论塔板高度,洗脱体积,分辨率。 2 不