TRIZOL同时提取RNA和蛋白.docVIP

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2022-05-05 发布于广西
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TRIZOL同时提取RNA和蛋白.doc

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TRIZOL（invitrogen life techologies） RNA提取 -80oC取标本取组织液氮中陶瓷研钵研磨，组织呈粉状时转移到预先称重的5毫升的塑料离心管中，离心管需要DEPC水处理后，灭菌。称重，得组织100mg 加入TRIZOL 1.5ml（-60 oC—-70oC下，可存放1个月）室温保温5min 加入氯仿0.3ml，盖紧手震动混匀15s 室温2-3min 4 oC，12000g 15min 取上清约0.8ml，转移到1.5ml离心管中，管子处理同上，去净上清的中下层液体用于DNA和蛋白质的提取加异丙醇0.7ml，混匀，室温下10min 4 oC，10000g 10min 弃上清，加1.4ml 75%乙醇（以DEPC处理灭菌水配制）混匀 4 oC，7000g 5min 弃上清，室温干燥5min DEPC处理灭菌纯水100?l溶解，-70 oC保存 DNA提取去净上清的中下层液体约0.6ml，加入100%乙醇0.45ml，混匀室温下2-3min 4 oC，5000g 5min 去除液体，可保留用为蛋白提取蛋白质提取转移上清到5ml的离心管中，大约体积为1ml 加入2.3ml异丙醇（1.5ml/mlTRIZOL），室温下保温10min 4 oC，12000g 10min 加入3ml（2ml/mlTRIZOL）含0.3M盐酸胍的95%乙醇，室温下20min 4 oC，7500g 5min 重复洗涤3次加入2ml乙醇，室温下20min 4 oC，7500g 5min 真空干燥蛋白沉淀5－10min，1%SDS溶解完全溶解需要在50 oC保温，不溶物可4 oC 10000g 10min离心去除上清转移至新管，可用于Western blotting或－20oC存放