临床生物化学检验技术-11-第11章-体液中酶的生物化学检验.pptVIP

六、碱性磷酸酶及其同工酶的测定 （二）检测方法 检测原理 连续检测法 在以2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)为缓冲液的碱性溶液中，ALP能催化无色的4- NPP分解出磷酸基团，生成游离的对硝基苯酚(4-NP或PNP)，4-NP在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色，在波长405 nm处连续监测吸光度增高速率，计算ALP活性。其反应式如下 碱性磷酸酶及其同工酶的测定 六、碱性磷酸酶及其同工酶的测定5 方法学评价 IFCC推荐法AMP作为缓冲液，AMP和二乙醇胺（DEA，日本推荐使用）都是激活型缓冲液，作为酶的底物参与磷酸酰基的转移，因此能增进酶促反应的速率，所测的的ALP活性要比用碳酸盐缓冲液高2～6倍。而DEA的激活作用比AMP更强。因此使用不同缓冲液的方法测的ALP活性参考区间不同。还有一种基于IFCC的方法，使用活性缓冲液N-甲基-D-葡萄糖胺( n-methyl-d-glucamine，MEG)，将底物加入到反应混合物中即可引发酶促反应 碱性磷酸酶及其同工酶的测定 六、碱性磷酸酶及其同工酶的测定 临床检测时需注意 溶血标本ALP酶活力会下降，凡可络合ALP的抗凝剂（如乙二胺四乙酸二钾盐即EDTA-K2）均可抑制酶活性 温度可影响测定结果，室温及冰箱贮存血清均可使酶活性升高，1～4日可使酶活性增高3%～6%；冰冻血清酶活性降低，复温后则恢复。因此，采集的标本最好及时测定 碱性磷酸酶及其同工酶的测定 六、碱性磷酸酶及其同工酶的测定 临床检测时需注意 不同饮食对ALP测定有一定影响，如高脂饮食可使小肠合成ALP增高，高糖饮食也可使酶活力升高，高蛋白饮食则使酶活力降低 用作检测摩尔吸光系数的标准品对硝基苯酚和底物磷酸对硝基苯酚必须达检测要求 碱性磷酸酶及其同工酶的测定 六、碱性磷酸酶及其同工酶的测定 参考区间 女性 1～12岁＜500U/L ＞15岁，40～150U/L 男性 1～12岁＜500U/L 12～15岁＜750U/L ＞25岁，40～150U/L 碱性磷酸酶及其同工酶的测定 七、酸性磷酸酶及其同工酶的测定 （一）检验项目 项目检测依据 酸性磷酸酶（ACP）是一种在酸性条件下催化磷酸单酯水解生成无机磷酸的水解酶。其作用类似ALP的磷酸酶，不同点是作用的最适pH偏酸，为4.5～7.0 酸性磷酸酶及其同工酶的测定 七、酸性磷酸酶及其同工酶的测定 ACP几乎存在于体内所有细胞中，主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内其中以前列腺含量最多。正常男性血液中ACP约1/3～1/2来自前列腺，女性血中ACP可能来自血小板或破骨细胞。ACP同工酶分为前列腺ACP（prostate acid phosphatase，PAP）和非前列腺ACP（如红细胞ACP、溶酶体ACP等）两大类。当组织细胞受损时，ACP释放入血增加 酸性磷酸酶及其同工酶的测定 七、酸性磷酸酶及其同工酶的测定 临床意义 临床上血清ACP活性测定主要是作为前列腺癌的辅助诊断、疗效观察及预后判断的指标。前列腺癌，特别是存在转移时，血清ACP明显增高，前列腺ACP更有诊断意义。溶血性疾病、急性尿潴留、变形性骨炎或者近期做过直肠检查者，ACP也可轻度升高 酸性磷酸酶及其同工酶的测定 七、酸性磷酸酶及其同工酶的测定 应用评价 血清中ACP的测定主要用于前列腺癌的辅助诊断及疗效观察指标，由于血清中ACP活性极不稳定，其活性测定的应用较少。由于ACP几乎存在于体内所以细胞中，为了鉴别血清中增加的酸性磷酸酶是来自前列腺还是来自其他器官，必须加以区别。为此可进一步采用某些抑制剂进行选择性抑制作用。例如：乙醇和酒石酸对前列腺酸性磷酸酶有显著的抑制作用，而对红血球酸性磷酸酶的抑制作用较弱 酸性磷酸酶及其同工酶的测定 七、酸性磷酸酶及其同工酶的测定 （二）检测方法 检测原理 连续检测法 ACP催化α-萘基磷酸盐，在pH 4.5～6.0的条件下释放无机磷酸盐。产物α-萘酚则偶联有色的偶氮试剂（如固红TR盐），通过在405 nm处监测偶氮化合物生成的速率来测定ACP的活性。其反应式为 酸性磷酸酶及其同工酶的测定 七、酸性磷酸酶及其同工酶的测定 方法学评价 Badson氏改良法属于连续监测法，但是需要两步才能完成。α-萘酚与重氮盐的反应在很短的时间内就能完成，显色的速度仅受α-萘酚产生的速率限制。ACP性质极不稳定，血清室温下放置2.5h ACP活力即可下降10%左右。每毫升血清中加入20μL 5mmol/L的醋酸缓冲液（pH 5.0）做稳定剂，在4℃可稳定3天左右 酸性磷酸酶及其同工酶的测定 七、酸性磷酸酶及其同工酶的测定 参考区间 成人总酶活性为0～9U/L，前列腺酸性磷酸酶为0～3U/L（连续监测法） 酸性磷酸酶及其同工酶的测定 八、淀粉酶及其同工酶的测定 （一）检验项