蓖麻根提取物对HepG2215HBsAg和HBeAg表达和抗菌作用的研究.doc

蓖麻根提取物对HepG2215HBsAg和HBeAg表达和抗菌作用的研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：蓖麻根提取物对HepG2215HBsAg和HBeAg表达和抗菌作用的研究 1 1 材料 2 2 方法 3 3 结果 4 4 讨论 5 文2：锌预处理对cfos表达和动物行为学的影响 6 1 材料与方法 7 2 结果 9 3 讨论 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 蓖麻根提取物对HepG2215HBsAg和HBeAg表达和抗菌作用的研究 文1：蓖麻根提取物对HepG2215HBsAg和HBeAg表达和抗菌作用的研究 蓖麻Ricinus communis L.，为大戟科植物，又名牛篦子草、红蓖麻、勒菜、草麻。据《本草纲目》记载蓖麻子，气味甘、辛、平，有小毒，主治水癓。以水研二十枚服之，吐恶沫，加至三十枚，三日一服，瘥则止。又主风虚寒热，身体疮痒浮肿，尸疰恶气，榨取油涂之，主偏风不遂，口眼斜，失音口噤，头风耳聋，舌胀喉痹，毒肿丹瘤，汤火伤等。蓖麻叶，有毒，主治脚气不仁，蒸捣裹之，日二三易即消。《中药大辞典》记载蓖麻子主治消肿拔毒，泻下通滞，治痈疽肿毒，瘰疠、喉痹，疥癞癣疮，水肿腹满，大便燥结;蓖麻根主治镇静解痉，祛风散瘀。治破伤风，癫痫，风湿疼痛，跌打疼痛，瘰疠。现代医学研究证明蓖麻子含蓖麻碱(Ricinine)、蓖麻毒蛋白(Ricinin)及脂肪酶。其中蓖麻毒蛋白近年文献报道对小鼠艾氏腹水瘤细胞、L1210白血病、B16黑痣瘤、Lewis肺癌、大肠癌、结肠癌等多种癌细胞有明显作用[1～3]。抗癌机制是经受体介导的内吞方式进入细胞，在细胞内通过逆分泌途径转运至内质网，在胞浆内催化核糖体60S亚基失活，从而抑制蛋白质合成[4～6]。另有研究表明蓖麻子提取物(蓖麻油和蓖麻蛋白)对小鼠有明显的抗生育作用[7]。目前研究仅限于蓖麻子，而对蓖麻根的研究近年无报道，为进一步了解蓖麻根的药理作用，，观察蓖麻根乙醇提取物对细胞分泌HBsAg与HBeAg表达的影响，并用MTT法观察其对细胞增殖的影响;采用平板法观察蓖麻根乙醇提取物对细菌的抑制作用。结果报道如下。 1 材料 ，购自北京大学医学院第一附属医院病毒研究所;细胞培养基RPMI1640为Gibco brL产品;胎牛血清(FBS)购自杭州四季青生物工程材料有限公司;谷氨酰胺、G418(Gibco分装)、胰蛋白酶、MTT、DMSO为Amresco公司产品;HBsAg、HBeAg ELISA检测试剂盒为上海容盛生物技术有限公司，批号为和;其余为分析纯试剂。二氧化碳培养箱(MCO3/15AC，日本三洋公司);倒置显微镜(XSB3/IA，上海);96孔细胞培养板(Gorning美国)。菌种：金黄色葡萄球菌4株为广西医科大学提供;白色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌3株、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型溶血性链球菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌、铜绿假单孢菌由桂林医学院微生物教研室提供;隔水式电热培养箱GNP-9270(上海精宏实验设备有限公司);蒸气高压灭菌锅MLS-3020(日本日立);水解酪蛋白琼脂为杭州天和微生物试剂有限公司提供。蓖麻采自桂林地区。 2 方法 蓖麻根的提取蓖麻根500g粉碎，以6倍95%乙醇加热回流提取3次，每次1 h，合并滤液，旋转蒸发仪浓缩干，置烤箱50℃烤干备用。另取500g蓖麻根，以50%乙醇加热回流提取3次，浓缩与干燥同上。 1 640中加入380 mg/L G418，10%胎牛血清，2 mmol/L谷氨酰氨，100U/ml青霉素和100 mg/L链霉素接种于培养瓶，置37℃、5%CO2的培养箱中常规培养。待细胞约80%融合时，进行传代培养。/ml接种于96孔细胞培养板中，每孔180μl，待细胞贴壁(24 h)后加药，分为5组：空白对照组，加入10%FBS的RPMI1 640培养基;蓖麻根95%乙醇提取物各剂量组(400，200，100，50)mg/L;蓖麻根50%乙醇提取物各剂量组(400，200，100，50)mg/L;每个浓度设3个复孔，每孔20 μl，37℃，5 %CO2培养箱孵育72 h后测定培养基上清液中HBsAg 与HBeAg 的含量[8] HBsAg与HBeAg含量的测定按照HBsAg，HBeAg的ELISA试剂盒说明，用波长为450 nm 酶标仪测定HepG 细胞株培养基上清液中HBsAg与HBeAg 的吸光度A值，计算蓖麻根提取物对HBsAg、HBeAg表达的抑制率。抑制率(%)=(实验孔P/N-对照孔P/N)÷(对照孔P/)×100%[9]。注：P/N为HBsAg或HBeA