2022年荧光原位杂技技术及其临床应用李宇中课件.pptxVIP

. 1 荧光原位杂交技术及其临床应用 荧光原位杂交（FISH） 将分子带进细胞遗传学的领域 ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第1页*** . 2 荧光原位杂交技术 90 岁月以后, 随着分子生物学技术的提高以及向各学科的渗透, 显现了一种新的运用分子手段分析染色体反常的方法, 即: 染色体荧光原位杂交( FISH) 技术, 该技术不仅可用于中期分裂相, 仍可在间期细胞显示杂交信号, 特殊适用于那些培育难以成功的各种组织细胞； ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第2页*** . 3 由细胞到DNA分子 ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第3页*** . 4 荧光原位杂交技术的基本概念 1.脱氧核糖核酸(DNA)分子 2.脱氧核糖核酸(DNA)探针 3.脱氧核糖核酸(DNA)变性 4.脱氧核糖核酸(DNA)杂交 ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第4页*** . 5 荧光原位杂交原理 FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸 为探针，依据碱基互补的原就，与待检材料中未 知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的 杂交双链核酸； ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第5页*** . 6 荧光原位杂交技术 荧光原位杂交技术（简称FISH）是用细胞遗传学和分子生物学的原理，通过荧光标记的核酸探针与细胞内的核酸序列杂交；借助荧光显微镜，在细胞和（或）组织中观看并分析细胞内杂交于靶序列的多种彩色探针信号，以获得细胞内多条染色体或多种基因状态的信息； ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第6页*** . 7 荧光原位杂交示意图 ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第7页*** . 8 常见的荧色物 荧色物 激发（nm） 散发（nm） DAPI 达比 350 470 FITC 异氰酸荧光素 490 525 Texas Red 德克莎斯红颜料 596 615 ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第8页*** . 9 荧光显微镜系统 ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第9页*** . 10 探针的标记的种类及比较 1.探针标记方法主要有两类： （1）直接标记法，就是荧光素通过一些方法直接连接到核酸序列上； （2）间接标记法，就是把地高辛或生物素等半抗原连接到核酸序列 ，然后在杂交过后的检测阶段，加入标记有荧光素的相应半抗原抗体参与反应进行检测； ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第10页*** . 11 探针的标记的种类及比较 2. 这两种标记方法相比较而言各有利弊；直接法便利，快捷且背景低，信号强度不及间接法强；间接法具有信号放大系统，信号强检测灵敏度高，但是间接法杂交过后检测步骤繁琐，背景信号强；近年来荧光的亮度和抗淬灭性的不断改进和提高, 直接标记的荧光探针越来越成为首选, 并接受多种不同颜色的荧光, 便利在同一标本上同时检测多种反常. 其荧光强度和信号大小都易于在一般荧光显微镜下观看, 操作过程中也不需要严格避光, 鉴于直接标记法已经可以获得较中意的信号，目前临床检测用的探针多为直接标记法标记； ***精品PPT资源防止被采集专用文字===》名师归纳总结=====》下载可删除===》欢迎各位下载 =====》 这是第11页*** . 12 临床常用的探针 临床使用的探针都是以DNA 为主； 常用探针主要有： （1）着丝粒探针； CEP:Chromosome Enumeration DNA Probes （2）位点特异型探针； LSI :Locus specific identifier （3）