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名称：Megazyme 乳糖和 D-半乳糖快速检测试剂盒 编号：K-LACGAR （115 次） 1.简介 乳糖是一种白色结晶双糖，它存在于哺乳动物所 的 。在乳糖酶（β -半乳糖苷酶）催化下，乳糖水解产生 D-半乳糖和 D-葡萄 糖。缺乏此酶的成年人不能消化牛奶中的乳糖，摄入 糖食品 30 分钟至两个小时后会出现呕吐、腹部绞痛、排气和腹泻等症状，称 为乳糖不耐症。美国人中有 3 千万到 5 千万人患有乳糖不耐症，并且某些人种和种族更为严重。高达 75%的非裔美国人和土著美国人 及 90%亚裔美国人都患有乳糖不耐症，而北欧血统的人则很少出现这一症状。 酶法分析测定乳糖的主要原理为β -半乳糖苷酶催化乳糖水解产生 D-半乳糖和 D-葡萄糖，通过检测 D-半乳糖和 D-葡萄糖的含量计算乳 糖含量。检测 D-半乳糖含量比检测 D-葡萄糖含量更可靠，因为游离 D-葡萄糖含量通常高于游离 D-半乳糖含量。 目前市场上的D-半乳糖检测试剂盒检测速度非常慢。因为 D-半乳糖包括α -和β -两种形式，并且自然化学变旋的概率很低，而β -半 乳糖脱氢酶往往只识别β -形式。开始孵育时，由于β -D-半乳糖快速被消耗，因此吸光度值迅速增加，随后由于α -D-半乳糖转变为β -D-半乳糖的速率非常低，因此吸光度值慢慢增加达到终点。Megazyme 乳糖和半乳糖检测试剂盒采用专利技术，在试剂盒中加入半乳 糖变旋酶，可快速催化限速变旋步骤，室温下 5 分钟即可获得检测结果（见图 1）。 北京市朝阳区北苑路32 号安全 A 座1704 室 T: F: PM284 2． 性能 ○ 特异性：该试剂盒可特异性检测乳糖和 D-半乳糖。 ○ 灵敏度：检测灵敏度为 0.010 吸光度值差异。这相当于样品最大体积为 1.00mL 时，样品溶液中乳糖浓度为 1.48 mg/L （或半乳糖 浓度为 0.74mg/L）。 ○ 检测限：乳糖的检测限为 2.96mg /L （在样品体积为1.00 mL，吸光度值差异为 0.020 得到）。 ○ 线性范围和精确性：线性检测范围为 4-80μ g D-半乳糖或 8-160μ g 乳糖。重复检测同一样品溶液，可能会有 0.005-0.010 的吸 光度值差异。这相当于体积为 1.00mL 的样品溶液中，乳糖浓度为 0.74-1.48 mg/L。如果样品在 过程中被稀释，结果计算时 应乘以稀释倍数 F。如果样品重量被称重，如 10g/L，可能会产生 0.02-0.05 g/100g 的差异。 3.检测原理 根据当前的检测方法（AOAC 984.15 修订版 牛奶中乳糖的检测），在 pH 5.0 下，乳糖被β -半乳糖苷酶催化，水解为 D-半乳糖和 D- 葡萄糖 (1) β -半乳糖苷酶 ( 1) 乳糖+ H O D-半乳糖+ D-葡萄糖 2 在半乳糖变旋酶（GaIM）催化下，α -D-半乳糖转化为β -D-半乳糖（2） GaIM ( 2) α -D-半乳糖 β -D-半乳糖 pH 8.6 时，在β -半乳糖脱氢酶（β - GaIDH）催化下，β -D-半乳糖被 NAD+氧化为 D-半乳糖酸 β - GaIDH ( 3) β -D-半乳糖 + NAD+ D-半乳糖酸+NADH+H+ 根据反应生成的 NADPH 的量计算乳糖的量。通过测定 340 nm 处增加的吸光度值计算 NADPH 的量。 4.试剂盒组成 组成 内容物