TGFβ1wtp53基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义.doc

TGFβ1wtp53基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：TGFβ1wtp53基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义 1 1 资料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 4 文2：p53和VEGF在前列腺癌组织中的表达及临床意义 5 1 资料与方法 7 2 结果 8 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 TGFβ1wtp53基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义 文1：TGFβ1wtp53基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义 【Abstract】 Objective To detect the expressio of TGFβ1 and wtp53 gene in prostate carcinoma and evaluate its Western blotting method was used to detect TGFβ1 and wtp53 expression in the normal and carcinomous prostatic TGFβ1 was similarly expressed in the normal and prostatic paraneoplastic tissues(P)，and so was wtp53(P). Either TGFβ1 or wtp53 was differently expressed in the carcinomous prostatic tissues compared with normal or paraneoplastic tissues(P 【Key words】 Prostate cancer;TGFβ;wtp53;Western blotting 研究表明前列腺癌的发生是基因调控失衡的结果，其生物学特性与多种癌基因、生长因子密切相关〔1～4〕。转化生长因子(TGF)β1有促进肿瘤侵袭、转移、血管增生以及免疫抑制等多种作用〔1〕。野生型p53(wtp53)是肿瘤抑制基因，突变后则是典型的显性癌基因，具有致癌的作用〔2〕。本研究运用免疫印迹技术分别检测了TGFβ1及wtp53基因在前列腺癌组织中的表达，并探讨其临床意义。 1 资料与方法 标本来源 2005年10月至2008年4月本院经直肠前列腺穿刺活检和手术切除后液氮保存的标本均经病理组织学确诊。前列腺癌36例(其中经影像学诊断为有远处转移的为24例)，年龄46～82岁。正常前列腺6例作对照。 主要试剂 兔抗人TGFβ1、p53多克隆一抗，羊抗兔辣根过氧化物酶标记的二抗，均购自武汉博士德生物工程有限公司。DAB显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。Western标志物是国产预染蛋白标志物。溴化乙锭、琼脂糖、SDS、TEMED、丙烯酰胺、N，N二甲基双丙烯酰胺、DTT、PMSF购自美国Sigma公司;DEPC 购自德国Merk公司;其他常规化学试剂均为分析纯产品。 主要仪器 凝胶成像系统(上海天能科技有限公司);蛋白质电泳装置及转移系统(Biorad，美国) wtp53、TGFβ1的蛋白表达 总蛋白提取 将液氮低温保存的前列腺组织、前列腺癌及癌旁组织剪碎后各取100 mg，分别加入500 μl蛋白裂解液，4℃，15 000 min匀浆后200 min离心15 min。上清移入另一管中，20 000 min离心60 min。弃上清，取沉淀重新悬浮于200 μl匀浆缓冲液中，加蛋白提取液，充分混匀，沸水加热变性10 min。应用蛋白分析试剂(BioRad，USA)测定蛋白浓度。 SDSPAGE电泳 配制SDS聚丙烯酰胺凝胶，固定于电泳装置，加入Tris甘氨酸电泳缓冲液，排除凝胶底部两玻璃板之间的气泡，向加样槽中加入各个样品(蛋白粗提液，含蛋白质40 μg)及蛋白标志物各25 μl，电压75 V，电泳30 min，然后120 V，1 h。电泳完毕后取出凝胶，用电转膜仪将蛋白质转移至硝酸纤维素膜，加封闭液封闭，室温2 h;加第一抗体，4℃温浴2 h;用250 ml TBST洗3次，每次10 min;加入第二抗体，室温1 h;用TBST洗涤3次，每次10 min;用DAB显色。 半定量结果分析 利用天能图像分析系统对显色结果拍照，记录电泳条带净光密度和强度值，以目的基因与内参βactin比值确定其含量计算其表达的相对丰度。 统计学处理 计量资料以x±s表示，采用统计软件进行组间的t检验。 2 结 果 免疫印迹结果 TGFβ1在相对分子量23 kD、wt