针刺调节MAPKERK通路对脑缺血模型大鼠的干预作用.doc

针刺调节MAPKERK通路对脑缺血模型大鼠的干预作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：针刺调节MAPKERK通路对脑缺血模型大鼠的干预作用 1 1材料与方法 2 文2：针刺调节MAPKERK通路对脑缺血模型大鼠的干预作用 6 1材料与方法 6 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 针刺调节MAPKERK通路对脑缺血模型大鼠的干预作用 文1：针刺调节MAPKERK通路对脑缺血模型大鼠的干预作用 细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase，ERK)是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases，MAPK)的一种，是非常保守的信号系统，它们存在于从酵母到哺乳动物的各种细胞中[1]。ERK调节着细胞的增殖、分化和存活，一方面可通过接受大量来自生长因子、丝裂原、环境刺激等的信号，另一方面通过ERK信号级联反应作用于核转录因子，调控基因表达[2-4]。目前，已开始寻找针对ERK途径中各个环节的调控机制，用以调控信号转导的途径，而ERK传导通路在局灶性脑缺血后被激活，并在缺血性组织损伤中发挥重要作用，针对ERK的变化规律进行有效干预可望为急性缺血性脑卒中提供一个新的路径。本研究观察了针刺调节MAPK/ERK通路对脑缺血模型大鼠的影响，现报道如下。 1材料与方法 11动物SPF级雄性SpragueDawley大鼠90只，体质量180～240 g，用抽签法随机分为假手术组、模型组和电针组，每组又分为2 h、1 d、3 d 3个时间段组，共9个亚组，每亚组各10只。手术后模型1 d组死亡2只，模型3 d组死亡1只，针刺2 h组死亡1只，死亡鼠均予剔除。 12主要仪器及试剂1寸毫针，直径03 mm×25 mm，由苏州医疗用品厂生产，华佗牌电子针疗仪由苏州医疗用品厂有限公司提供，Y迷宫由上海仕元科学器械有限公司提供，932型电热凝器由上海医疗器械八厂生产。磷酸化p44/42MAP Kinase一抗由武汉博士德公司提供，免疫组化染色试剂盒(即用型SABC)由武汉博士德公司提供。 13模型复制采用热凝闭大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型[5]。假手术组只暴露大鼠大脑中动脉，不予凝闭。治疗组造模后立即给予电针治疗。 14治疗方法治疗组选取督脉经穴百会、大椎两穴[6]，以毫针斜刺百会03寸，直刺大椎03寸，用疏密波，5～10次，强度以大鼠安静耐受为度，约3～5 V，时间30 min，每天1次。分别连续治疗2 h、1 d和3 d。 15动物神经运动功能体征的观察采用Bedeon评分标准。假手术组、模型组和电针组3组大鼠于造模后2 h、1 d和3 d不同时间段每组随机抽取8只大鼠分别进行神经功能行为评分。 2010年第27卷广州中医药大学学报杨忠华，等.针刺调节MAPK/ERK通路对脑缺血模型大鼠的干预作用第1期16Y迷宫实验Y型电迷宫3条臂的尽头均有1灯，底部是电网，其中只有1条臂尽头的灯发出亮光，此时该臂底部电网无电流通过，即为安全区。另两臂的灯不亮，底部电网通电(约50 V)，为非安全区。安全区与非安全区随机改变。实验开始时，将动物放入迷宫中任一臂中适应2～3 min。然后将其他任一臂的信号灯打开作为条件刺激，经1 s延迟后，灯不亮的两臂通电(非条件刺激)。当动物逃避电击至安全区后，灯亮持续15 s，然后熄灯休息45 s，即完成1次操作并记录所用时间。然后再开始下一次操作。 161筛选将大鼠放入Y迷宫箱中适应3～5 min，给予适当电击，至其对3臂均探索进入为止，选择活跃，对电击反应较敏感的大鼠入组，淘汰反应过于迟钝或敏感的大鼠。 162学习测试对筛选后的大鼠，采用固定次数随机法[7]，每天给予20次迷宫训练。安全区以无规则次序变换，大鼠受电击逃到安全区后，灯光继续作用10～15 s，熄灯后结束1次测试，大鼠所在支臂作为下一次测试的起点。每只大鼠每天固定训练20次，连续训练4 d。以大鼠受信号刺激后跑向红灯安全区，在安全区躲避30 s以上，不再跑回其他2臂为正确反应。 163学会标准以连续20次测试中的错误反应次数(error number，EN)≤2次作为学会标准。从筛选后学习测试达标的各组大鼠中随机取5只，分别于手术后2 h、1 d和3 d进行试验，观察各组大鼠受到电刺激后从非安全区跑至安全区所用时间作为在Y型迷宫的测试成绩。 17磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)表达检测上述各组动物进行实验后在规定时间内腹腔内注射100 mg/L水合氯醛(40 mg/kg)麻醉动物。开胸后剪开右心