《动植物检验检疫学(第2版)》教学课件—02植物、植物产品检验检疫.pptVIP

（四）血清学检验 3．乳胶凝集法。 用致敏乳胶吸附抗体制成特异性抗体致敏乳胶悬液，它与抗原反应后，乳胶分子吸附的抗体与抗原结合，凝集成复杂的交联体，凝集反应清晰可辨。检查大麦种子传带大麦条纹花叶病毒时，可取1周龄大麦幼苗嫩尖的榨取汁测定。 4．酶联免疫吸咐法。 该法是用酶作为标记或指示剂进行抗原的定性、定量测定。直接酶联法用特异性酶标抗体球蛋白检出样品中的抗原。操作时，先将等测抗原置入微量反应板凹孔中培育，在吸附抗原后洗涤，保留吸附孔壁的抗原，随后加入特异性酶标记抗体，经洗涤后保留与抗原相结合的酶标抗体，形成抗原抗体复合物，再加酶的底物形成有色产物，用肉眼定性判断或用酶标仪定量测定。 （四）血清学检验 5．免疫电镜法。 该法将病毒粒体的直接观察与血清反应的特异性结合起来检测病毒。现已用于检测多种作物种子传带的各类病毒。该法对抗血清质量的要求不甚严格，能使用效价较低或混杂有非特异性（寄主）抗体的抗血清，另外，该法灵敏度高，特异性范围较宽，无严格的病毒株系专化性，尤适于种传病毒检验。从干种子磨粉用缓冲液悬浮起到透射电镜观察的整个操作过程最快只需1.5小时。 （四）血清学检验 6．分子生物学检验。 用于病毒检测的技术主要有核酸分子杂交技术和聚合酶链式反应（PCR）。 分子杂交技术是基于病毒ＲNＡ或DNＡ链之间碱基互相配对的基本原理，是对病毒基因组的分析和鉴定。因此，具有灵敏度高，特异性强的特点。在病毒及类病毒的鉴定工作中愈来愈被广泛应用。通过一定的技术，制备带有标记物的目标病毒检测探针，和待检ＲNＡ或DNＡ进行核酸链之间碱基的特异配对，形成稳定的双链分子，然后通过放射性自显影或液闪计数来检测标样的核苷酸片段，达到检测目的。 第八节、植物寄生线虫的检验 （一）直接检验 适用检验固着在植物体内或以休眠状态生存于植物组织内线虫，如粒瘿线虫、根结线虫、胞囊线虫、水稻干尖线虫等。 首先以肉眼和手持放大镜仔细检查种子，检出畸形、变色、干秕种子以及夹杂的土粒杂质等，作进一步检查。小麦粒瘿线虫 和剪股颖粒线虫都使寄主子实形成虫瘿。水稻茎线虫侵染的病粒变褐色，颖部不闭合，谷形瘠细或成为空谷。无性繁殖材料，从根系到茎、叶、芽、花等部位均应仔细检查，要特别注意根、块茎等部位有无根结、瘿瘤，根部有无黄色、褐色或白色针头大小的颗粒状物，须根有否增生，根部有否产生斑点、斑痕等症状。 组织是否肿大、畸形等症状。病材料可用浸泡、解剖和染色等方法检出线虫。 第八节、植物寄生线虫的检验 （二）染色检验 适于检验植物组织中的内寄生线虫。烧杯中加入酸性品红乳酸酚溶液，加热至沸腾，加入洗净的植物材料，透明染色1-3分钟后取出用冷水冲洗，然后转移到培养皿中，加入乳酸酚溶液褪色，用解剖镜检查植物组织中有无染成红色的线虫。 第八节、植物寄生线虫的检验 （三）分离检验 将病原线虫由寄主体内、土壤或其它载体中分离出来，再鉴定种类。 1．改良贝尔曼漏斗法。 此法适于分离少量植物材料中有活动能力的线虫。基本装置是一个直径适当的漏斗，漏斗颈末端接一段乳胶管，用弹簧夹把管子夹住。漏斗放置在支架上，其内盛满清水。把检验的植物材料洗掉泥土后，切成0.5cm长的小段，放在纱布中包起来，轻轻地浸入漏斗内。线虫从植物组织中逸出，经纱布沉落到漏斗颈底，经12小时或过一夜后，打开弹簧夹使胶管前端的水流到玻皿内，镜检线虫。 （三）分离检验 1．改良贝尔曼漏斗法。 2．过筛检验法。 本法用于从大量土壤中分离各类线虫。将充分混匀的土壤样品置于不锈钢盆或塑料盆中，加入2-3倍的冷水，搅拌土壤并振碎土块后过20目筛，土壤悬浮液流入第二个盆中并喷水洗涤筛上物，弃去第一个盆中和筛上的剩余物，第二个盆中的土壤悬浮液经１分钟沉淀后再按上法过150目筛，从筛子背面将筛中物冲洗到烧杯中，盆中土壤悬浮液再继续过325目和500目筛。筛中物收集在烧杯中静置20-30分钟，线虫沉集底部，弃去上清液，将沉集物转移到玻皿内镜检或吸取线虫鉴定。 3．漂浮分离法。 3．漂浮分离法。 本法利用干燥的线虫胞囊能漂浮在水面的特性分离土壤中的马铃薯金线虫 和各种胞囊线虫。 芬威克漂浮法利用称为芬威克罐的装置进行分离。使用时先将漂浮筒注满水，并打湿16目筛和60目筛。风干的土壤经6mm筛过筛并充分混匀后取200g土样，放在16目筛内用水流冲洗，胞囊和草屑漂在水面并溢出，经簸箕状水槽流到底部60目筛中，用水冲洗底筛上的胞囊于瓶内，再往瓶内注水但不溢出，静置10分钟，胞囊即浮于水面，然后轻轻倒入铺有滤纸的漏斗中过滤，胞囊附着滤纸上，滤纸晾干后，放在双目解剖镜下观察。 简易漂浮法适于检查少量含有胞囊的土样。该法用粗目筛筛去风干土土样中的植物残屑等杂物，称取50g筛底土放在750ml三角瓶中，加水至1/3处，摇动振荡几分钟后再加水至瓶口