基因重组与基因工程70.pptxVIP

第十四章 基因重组和基因工程Genetic bination Genetic Engineering;1973年，Stanley Cohen等首次在体外获得重组DNA的分子克隆, 开创了重组DNA技术的新领域 目前重组DNA技术已成为许多实验室的一项常规技术 重组DNA技术的建立和发展基于长期以来人们对自然界普遍存在的各种基因转移和重组现象的认识和研究;;;第一节 DNA重组 (DNA bination); DNA重组 —— 指不同DNA分子间发生的共价连接 类型： 同源重组 (homologous bination) 特异位点重组 (site-specific bination) 转座重组 (transpositional bination);一、同源重组  /基本重组（general bination）;同源重组机制 例: 大肠杆菌E.coli DNA的同源重组机制 参与重组的主要酶和辅助因子: RecA蛋白: 可结合单链DNA RecBCD复合物：核酸外切酶 核酸内切酶 解螺旋酶 RuvC: 核酸内切酶;;;二、细菌的基因转移与重组;质粒 — 指存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子，它所携带的遗传信息能赋予细菌一些特殊的表型;(二) 转化作用（transformation） 通过自动获取或人为地供给外源DNA, 使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型 即细菌摄取外源DNA分子并导致其基因型发生改变的过程;;(三) 转导作用(transduction) 当病毒从被感染的（供体）细胞释放出来、再次感染另一（受体）细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组过程，称为转导作用。;;;三、特异位点的重组 （site-specific bination）;;;四、转座重组（transposition）;（一）插入序列转座 1．插入序列的结构 包括：两个反向重复序列 一个转座酶编码基因 两个正向重复序列;2．类型 a. 保守性转座： 指插入序列从原位迁至新位 b. 复制性转座： 指插入序列复制后，其中的一个复制本 迁移至新位，另一个仍保留在原位;（二）转座子转座 转座子(tansposons): 指可从一个染色体位点转移至另一位点的分散重复序列，包??两个反向重复序列（作为侧翼序列）、一个转座酶编码基因和抗生素抗性基因等有用的基因。 ;;第二节 重组DNA技术 (DNA bination Technique);一、重组DNA技术相关概念; DNA克隆 (DNA cloning): 应用酶学的方法，在体外将各种来源的DNA与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子-复制子 (replicon),继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化细胞, 再进行扩增 、提取获得大量同一DNA分子的过程 嵌合DNA (DNA chimeras) : 外源DNA分子与载体DNA的杂合分子;重组DNA技术： 实现基因克隆所采用的方法及相关的工作 主要包括：工具酶的应用 核酸的分子杂交技术 基因的无性繁殖 DNA核苷酸序列测定;;（二）工具酶 限制性核酸内切酶 (restriction endonuclease) 识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶;;（2）II型限制性内切酶特点： a. 特异性识别双链DNA，被识别序列常呈二元旋转对称（回文结构）； b. 通常识别的碱基序列为4~6个碱基对, 识别数目愈少，切点愈多； c. 切割DNA后产生两个分别含5’—磷酸基团和 3’—OH基团的末端； d. 切割方式：不同的酶可以不同方式剪切，产生末端不同的DNA