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人造血干细胞在不同氧浓度下生长凋亡状况的差异观察 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：人造血干细胞在不同氧浓度下生长凋亡状况的差异观察 1 1、材料与方法 2 2、结果 3 3、讨论 5 4、结论 6 文2：生长及凋亡作用的实验研究 6 1 材料 6 2 方法 7 3 结果 12 4 讨论 12 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 16 文章致谢（模板） 16 正文 人造血干细胞在不同氧浓度下生长凋亡状况的差异观察 文1：人造血干细胞在不同氧浓度下生长凋亡状况的差异观察 人造血干细胞（HSCs）在不同因素直接影响下增殖、分化成各种细胞，如骨髓组织细胞、淋巴组织细胞、白细胞、红细胞、上皮组织细胞等。HSCs具备不停自我更新和变异的潜力。1988年THOMSON等[1]在实验室成功建立了胚胎干细胞系。从此以后，HSCs在实验室被进一步培养为多种细胞，包括骨细胞、软骨细胞[2]、血细胞、神经细胞、肌肉细胞、胰岛细胞等[3，4]。基于HSCs优良的不断增殖和多向分化能力，在组织损伤重建的研究中HSCs表现出突出的作用[5]。与此同时，在临床修复治疗中HSCs的多向分化性也获得了广泛应用。在干细胞的培养条件中环境因素至关重要，不同的环境因素包括氧浓度、pH值、温度、渗透压等，均能影响干细胞的增殖与分化。氧浓度对干细胞的生长和凋亡有至关重要的影响，JOBIN等[6]的研究发现，在体外培养的低氧环境下，干细胞的生长受到明显干预。本研究主要观察HSCs在人体外培养的状况下，在不同氧浓度中的生长和凋亡情况，为将来的基础性试验与临床应用提供一定依据。 1、材料与方法 材料 HSCs由上海拜沃生物科技有限公司提供。RPMI1640培养液（上海钰森生物技术有限公司）、MethoCultTMHCC4230培养基（加拿大StemcellTechnologiesInc公司）、IMDM培养基（上海北诺生物科技有限公司）、二氧化碳培养箱（长沙长锦科技有限公司）、AnnextinV（美国Becton，DickionandCompany）、微氧手套箱（COYLaboratoryProducts公司）、6孔培养板（广州洁特生物过滤股份有限公司）、AnnexinV-FITC细胞凋亡检验试剂盒（杭州昊鑫生物科技股份有限公司）、CKC-TR-2W型倒置显微镜（Olympus，Japan）、YJ-875型超净化工作台（苏州安泰净化设备厂）、BD-CAN7型流式细胞仪（美国Becton，DickionandCompany） 方法 HSCs用10%胎牛血清的RP-MI1640培养液培养。 将HSCs分为实验组和对照组。实验组细胞在微氧手套箱中培养的氧浓度分别设定为：3%、5%、15%；对照组细胞在微氧手套箱中培养的氧浓度设定为20% （CFU-E）集落培养 采用MethoCultTMHCC4230培养基，（细胞密度2×109个/升），用IM-DM培养基补足为1mL，充分混匀后转移至35mm的6孔培养板，每份标本重复5孔，置不同氧浓度，37℃饱和湿度的培养箱内，培养4、7、10d时分别计数CFU-E集落数。 采用10%胎牛血清的RPMI1640培养基，（细胞密度2×109个/升），用IM-DM培养基补足为1mL，将HSCs在不同氧浓度下分别培养6、12、24h，使用AnnexinV-FITC细胞凋亡检验试剂盒，通过BD-CAN7型流式细胞仪检测HSCs凋亡率。 氧浓度为3%、5%、15%、20%分别记作3%氧浓度组、5%氧浓度组、15%氧浓度组、对照组。培养4、7、10d时研究不同氧浓度和CFU-E集落数的相关性；培养6、12、24h时研究不同氧浓度和HSCs凋亡率的相关性。 统计学处理 采用统计软件对数据进行分析处理。符合正态分布的计量资料以表示，不同时间、不同氧浓度下统计数据比较采用LSD-t检验；相关性采用Peaon相关分析。以P为差异有统计学意义。 2、结果 人造血干细胞 倒置显微镜下观察分离培养的人血干细胞，见图1。 图1人造血干细胞（HE×400) 集落数结果 培养4、7、10d，5%氧浓度组CFU-E集落数最高，3%和5%氧浓度组与对照组CFU-E集落数比较，差异均有统计学意义（P）。见表1。 表1各组CFU-E集落数比较 不同氧浓度组HSCs凋亡率比较 培养6h，5%氧浓度组HSCs凋亡率最低，3%和5%氧浓度组与对照组HSCs凋亡率比较，差异均有统计学意义（P）；培养12h，5%氧浓度组HSCs凋亡率最低，5%和15%氧浓度组与对照组HSCs凋亡率比较，差异均有统计学意义（P）；培养24h，5%氧浓度组HSCs凋亡率最低，3%和5%氧