细胞生物学知识点.pdfVIP

§2.1 细胞显微方法概述 §2.2 光学显微镜 一、分辨率 一、复式显微镜 1.分辨率的概念 1.普通复式显微镜可分为：单筒显微镜、双筒显微镜 分辨率是指能够分辨出相邻两质点间的最小距离， 表示。距离越小，分辨率越高。r 2.普通复式显微镜的基本结构 分辨极限：人眼分辨率 0.2mm （1）照明系统：可见光 光镜分辨率 0.2μm （2）光学系统：玻璃透镜（目镜、物镜、聚光镜） 电镜分辨率 0.2nm （3）机械与支架系统 0.61 3.普通复式显微镜的缺点：由于光的干涉、衍射现象，光线通过样品时，两个相邻焦点的图 2.分辨率的表达式：r nsin 像可能发生重叠，进而无法分辨，导致存在分辨极限。 n 其中： 为介质折射率； 为样品对物镜镜口角（孔径角）的半角； 二、相差显微镜 1.相差显微镜 为入射光波长，可见光波长约400～700nm。 （1）相差显微镜概述 相差显微镜是指，利用光线的干涉、衍射特征，使相位差转变为振幅差，增强样品的明 nsin称为物镜的数值孔径，缩写为NA。 普通物镜NA 为0.05～0.95 暗对比，从而观察无色透明样品的装置。 油 镜NA 为0.85～1.40 （2）相差显微镜的特殊构件：相差板、环状光阑 3.分辨率的限制因素：入射光波长、介质折射率、物镜镜口角 相差显微镜在物镜后装有相差板，相差板部分区域有吸光物质，使得光线分别通过相差 （1）入射光波长：入射光波长越短，分辨率越大。目前所用蓝光波长最短，约450nm。 板不同区域时相位差增大，汇聚后经叠加使振幅增大或减小。从而将相位差转变为振幅差， （2）数值孔径：数值孔径越大，分辨率越大。 增强样品的明暗对比。 n n n 介质折射率 越大，NA越大，分辨率越大。空气 为1，油 为1.5。