六项呼吸道病原菌核酸检测试剂盒（多重荧光PCR法）注册技术审评报告.docx

受理号：CSZ2000253 体外诊断试剂产品注册技术审评报告 产品中文名称：六项呼吸道病原菌核酸检测试剂盒 （多重荧光PCR 法） 产品管理类别：第三类 申请人名 称：圣湘生物科技股份有限公司 国家药品监督管理局 医疗器械技术审评中心 — 1 — 目 录 基本信息 3 一、申请人名称 3 二、申请人住所 3 三、生产地址 3 产品审评摘要 4 一、产品概述 4 二、临床前研究摘要 5 三、临床评价摘要 11 四、风险分析及说明书提示 14 综合评价意见 16 — 2 — 基本信息 一、申请人名称 圣湘生物科技股份有限公司 二、申请人住所 长沙高新技术产业开发区麓松路 680 号 三、生产地址 长沙高新技术产业开发区麓松路 680 号 — 3 — 技术审评概述 一、产品概述 （一）产品主要组成成分 序号组成规格与装量主要成分1下呼六-PCR 序号 组成 规格与装量 主要成分 1 下呼六-PCR反应液 1056μL管×1管 引物，探针，dNTPs， PCR buffer等 2 下呼六-酶混合液 24μL/管×1管 Taq酶，UDG酶 3 下呼六-阳性对照 1000μL/管×1管 质粒 4 下呼六-阴性对照 1000μL/管×1管 生理盐水 其他内容详见产品说明书 （二）产品预期用途 本试剂盒用于定性检测人痰液中临床常见下呼吸道病 原菌，包括肺炎克雷伯杆菌、肺炎链球菌、荚膜型流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌和金黄色葡萄球菌。 检测结果可用于呼吸道疑似细菌感染的住院病人或重症病人的辅助诊断，检测结果不直接用于指导抗生素的使用， 临床诊断应结合病原体培养鉴定。 （三）产品包装规格 24人份/盒 （四）产品检验原理 本试剂盒是基于Taq酶水解荧光探针产生荧光信号及带 — 4 — 荧光产物杂交产生荧光信号的两种技术原理，针对单色荧光通道中一个目标靶点的检测采用荧光探针，另一个目标靶点的检测采用熔解曲线的方式，从而实现在单色荧光通道中同时进行两个目标靶点的检测和分析。试剂盒针对待检测细菌核酸保守区设计的特异性引物、特异荧光探针，配以PCR反应液等组分，在荧光定量PCR仪上，应用多重实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现对待测样本中下呼吸道病原菌核酸的快速检测。 PCR检测体系含有阳性内对照（内标），通过检测待测样本中编码甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)管家基因的DNA 是否正常，进而来监测待测样本的提取过程和PCR扩增过程， 避免假阴性结果。 二、临床前研究概述 （一）主要原材料 主要原材料的选择 本产品的主要原材料包括：引物、探针、dNTPs、热启动Taq酶、UDG酶、质粒。这些原材料均为外购方式获得。引物、探针为申请人自行设计后由专业合成公司合成。申请人选择有资质的供应商提供的原料，通过功能性试验，筛选出最佳原材料和供应商，制定了各主要原材料的质量标准并经检验合格。 企业参考品和质控品设置情况 — 5 — 企业参考品采用真实样本制备而成，包括阳性参考品 （PC1~PC12）、阴性参考品（NC1~NC8）、检测限参考品 （LC1-LC6）以及精密度参考品（RC1~RC2）。 阳性参考品（PC1~PC12）由经过灭活处理后不同浓度的12份六项呼吸道病原菌阳性样品组成，其中PC1、PC2肺炎链球菌阳性，其余病原菌阴性；PC3、PC4肺炎克雷伯杆菌阳性，其余病原菌阴性；PC5、PC6流感嗜血杆菌阳性，其余病原菌阴性；PC7、PC8金黄色葡萄球菌阳性，其余病原菌阴性； PC9、PC10铜绿假单胞菌阳性，其余病原菌阴性；PC11、PC12 嗜肺军团菌阳性，其余病原菌阴性。 阴性参考品NC1～NC6为种属相近的或引起症状相似的病原菌，分别为溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、鲍曼不动杆 菌、大肠埃希菌、粘质沙雷氏菌、嗜麦芽窄食单胞菌阳性样 本，NC7，NC8为正常人痰液样本。 检测限参考品LC1～LC6为试剂盒覆盖的6种阳性病原 菌，其中LC1为肺炎克雷伯杆菌、LC2为肺炎链球菌、LC3 为流感嗜血杆菌、LC4金黄色葡萄球菌、LC5为铜绿假单胞 菌、LC6嗜肺军团菌。 精密度参考品RC1~RC2为试剂盒覆盖的6种阳性病原菌 混合样品。 试剂盒包含阳性对照品和阴性对照品各1支，用于检测 过程的质量控制。阳性对照品为添加有内标基因和目标病原 — 6 — 菌基因的混合质粒样本，覆盖试剂盒可检出的所有目标病原菌，阴性对照品为生理盐水。 （二）生产工艺及反应体系研究 申请人通过对试剂主要生产工艺的研究，确定了最佳生产工艺。申请人对样本中可能存在的抑制因素进行了测试， 以及对样本核酸提取方法、取样量、上机用量进行了研究； 同时对引物、探针、Taq酶、UDG酶、dNTPs、Mg离子等的浓度和体积进行了优化；并对反应条件进行优化，包括痰液