洁净环境灭菌与检查.pptVIP

任务分析： 采用沉降法，即通过于培养皿中利用自然沉降原理收集在空气中的生物粒子，经不少于48小时的培养，在30—35℃下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度，并做好检查记录。 ?上海农林职业技术学院 第二十八页，共四十二页。 任务实施： 一、器材准备 高压消毒锅：使用时严格按照说明书操作。恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。培养皿：Φ90mm玻璃培养皿培养基：营养琼脂 ?上海农林职业技术学院 第二十九页，共四十二页。 二、 操作程序 采样将已制备好的培养平皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖上后倒置。 ?上海农林职业技术学院 第三十页，共四十二页。 采样点数目及其布置 沉降菌测试的最少采样点数目可查表1确定。在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2。 ?上海农林职业技术学院 第三十一页，共四十二页。 表1 最小采样点数目 ?上海农林职业技术学院 面积（m2??） 洁净度级别 100 10,000 100,000 300,000 ＜10 2~3 2 2 2 ≥10~＜20 4 2 2 2 ≥20~＜40 8 2 2 2 ≥40~＜100 16 4 2 2 ≥100~＜200 40 10 3 2 注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积；对非单向流洁净室，指的是房间面积。 第三十二页，共四十二页。 表2 最少培养皿数 ?上海农林职业技术学院 洁净度级别 所需Φ90mm培养皿数 100 14 10,000 2 100,000 2 300,000 2 第三十三页，共四十二页。 采样点的位置 工作区采样点的位置离地0.8~1.5m左右（略高于工作面）。 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。  ?上海农林职业技术学院 第三十四页，共四十二页。 培养：1、 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中 培养。2、 在30－35℃培养箱中培养，时间不少于48小时。3、 每批培养基应有对照实验，检验培养基本身是否 污染。 可每批选定3只培养皿做对照实验。 ?上海农林职业技术学院 第三十五页，共四十二页。 菌落计数 1、用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后 用5－10倍放大镜检查，是否有遗漏。2、若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时 仍以2个或2个以上菌落计数。 ?上海农林职业技术学院 第三十六页，共四十二页。 注意事项1、 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。2、 采取一切措施防止人为对样本的污染。3、 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。4、 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于 培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长 的菌落，须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要 时用显 微镜鉴别。5、 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破 损或污染的应剔除。 ?上海农林职业技术学院 第三十七页，共四十二页。 结果计算 用计数方法得出各个培养皿的菌落数. 平均菌落数的计算：平均菌落数=（M1+M2+…Mn）/n 式中： M1 — 1号培养皿菌落数　　 M2 — 2号培养皿菌落数　　　 Mn — n号培养皿菌落数　　　 n — 培养皿总数。 ?上海农林职业技术学院 第三十八页，共四十二页。 结果判定 用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物数。1、洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。2、若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均需合格。 记录： 测试报告中应记录房间温度、相对湿度及测试状态。 ?上海农林职业技术学院 第三十九页，共四十二页。 测试规则 测试状态1、 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。2、 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。3、 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。 ?上海农林职业技术学院 第四十页，共四十二页。 测试人员1、 测试人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。2 、静态测试时，室内测试人员不得多于二人。 测试时间1、 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。2、 对非单向流，如10,000级，100,000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分