研究丙型肝炎临床检验技术发展现状与展望（临床医学资料）.docVIP

研究丙型肝炎临床检验技术发展现状与展望（临床医学资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：研究丙型肝炎临床检验技术发展现状与展望 1 1 抗-HCV的检测 1 3 HCV抗原的检测 4 4 同时检测抗-HCV和HCV核心抗原 4 文2：丙型肝炎临床检验技术发展现状与展望 5 1 抗-HCV的检测 6 3 HCV抗原的检测 8 4 同时检测抗-HCV和HCV核心抗原 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 研究丙型肝炎临床检验技术发展现状与展望（临床医学资料） 文1：研究丙型肝炎临床检验技术发展现状与展望 1 抗-HCV的检测 最早出现的HCV检测技术是抗-HCV的检测。由于HCV在病人外周血液中的含量及病毒抗原的含量很低，这就使得用常规方法难以直接检测，经过十几年的不断改进和发展，其检测方法又演变出多种，如:双抗原夹心 ELISA、间接酶联免疫吸附实验(间接 ELISA)、重组免疫印迹法(RIBA)、蛋白芯片检测法以及免疫层析法。在这些方法之中，重组免疫印迹法 (RIBA)是抗体检测的金标准，蛋白芯片检测法主要用于抗-HCV的分型。而ELISA由于其操作简单，检测设备廉价，因此成为应用最广的抗体检测技术。 根据出现时间的先后以及使用抗原的不同，抗-HCV检测技术可分成三代。第一代抗-HCV IgG试剂盒所用的抗原来自病毒基因组非结构区 (C100)，它的使用使 HCV的输血感染率下降了80%以上。但其缺陷是:灵敏度较低，抗体检出时间较晚， 敏感性也较高，达到80％～90％，但假阳性较高。第二代试剂除了包被C100抗原外又加入了HCV核心区多肽C22—3和非结构区抗原C33C。抗-C22-3和抗-C33C感染后出现较早，敏感性和特异性明显提高，感染后8～12周即可检测。且对 HCV的特异性较好，二者联合应用可进一步提高检出率。第三代HCV抗体ELISA试剂中采用了重组的多肽，核心区抗原比例相对下降，而相应地增加了非结构区的区 C33C抗原的比例，添加了区抗原使其敏感性和特异性得到进一步改善。 上述三代抗-HCV检测方法多采用间接 ELISA，虽然也有过双抗原夹心直接检测抗-HCV的报道[3]，但由于HCV抗原存在不稳定性，因此至今仍无商品化的试剂盒。目前我国市售的抗- HCV试剂盒普遍是采用间接法的第三代抗-HCV ELISA试剂盒和胶体金试剂盒，其特异性可以达到92%～100%。但由于各厂家使用的HCV基因重组抗原的质量和各抗原片段包被比例有所不同，从而使各厂家试剂的灵敏度和特异性存在一定的差异，导致抗一HCV检测结果的不一致，产生漏检和假阳性等[4]，未能解决在正常ALT者和健康献血者存在的假阳性问题。加上少部分免疫功能不正常的HCV感染者，则不能检出抗一HCV。另外，由于“窗口期”的存在，仍有一定的漏检率[5]。目前抗-HCV的检测方法仍有改进的潜力，随着对HCV的研究不断深入，更多的 HCV蛋白会被发现，其中新型核心蛋白和外膜蛋白被认为能有效提高抗-HCV的灵敏度，但其对抗体的检出率依赖于抗原的获得方法，可能与抗原的构象表位有关[6，7] 2 HCV-RNA核酸扩增检测技术(Nucleic-acid Amplification Technology NAT) 从外周血中检出HCV RNA是HCV复制活跃的可靠指标，在感染2个星期内的血清中可检测到HCVRNA，在感染自然恢复前血清中 HCVRNA将达到一个高峰[8]， 目前NAT检测被国内外部分机构作为 HCV感染的确认方法。但HCV RNA在达到峰值或重新出现前数天或数周内偶尔也可能检测不到[9]。同时HCV RNA还受进食的影响，易与血中脂质及脂蛋白结合，降低检出率[10]。因此在一定程度上影响了NAT检测方法的完美。另外由于NAT检测技术本身在技术和设备上要求较高，且耗时、实验步骤较多(其中任何步骤出现问题均影响其检出)，因此该方法也容易因污染而出现假阳性，难以在常规工作或基层实验室推广，限制了其应用的普遍性。 NAT检测技术同为检测HCV RNA，但不同的厂商发展出不同的方法和技术，其中PCR技术发展得最为迅速，也得到了最广泛的应用，最早的是 RT-PCR，然后是套式PCR，现在是实时荧光定量PCR，检测灵敏度特异性不断提高，且实现了全自动定量检测。最新的NAT研究有环介导等温基因扩增技术(LAMP)以及基因芯片技术[11，12]，由于LAMP技术操作简单，且无需特殊仪器，具有广阔的应用前景。 3 HCV抗原的检测 目前报道有两类HCV抗原包括非结构抗原和核心抗原的检测可作为HCV感染的指标。血清中HCV抗原的