探讨紫檀芪对人软骨细胞氧化应激性凋亡的影响（外科学资料）.docVIP

探讨紫檀芪对人软骨细胞氧化应激性凋亡的影响（外科学资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：探讨紫檀芪对人软骨细胞氧化应激性凋亡的影响 1 1、材料和方法 3 2、结果 6 3、讨论 7 文2：雌孕激素对人卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响 9 1 材料与方法 10 2 结 果 11 3 讨 论 12 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 探讨紫檀芪对人软骨细胞氧化应激性凋亡的影响（外科学资料） 文1：探讨紫檀芪对人软骨细胞氧化应激性凋亡的影响 文题释义： 紫檀芪(pterostilbene，PTE)：是紫檀、蓝莓、葡萄和花榈木等中药植物的有效成分之一，是白藜芦醇衍生的非黄酮类多酚化合物，两者具有相似的药理特性。紫檀芪是一种强大的天然抗氧化剂，已有证明能降低细胞氧化应激和活性氧的发生，并抑制不同细胞系过氧化氢酶的表达增加。 氧化应激：是指体内氧化与抗氧化作用失衡，倾向于氧化，导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物。氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用，并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素。 骨关节炎是老年群体常见的一种慢性退行性疾病，其主要特征为关节软骨退变、软骨下骨硬化及周围软组织炎症增生，全世界约15%的人口患有骨关节炎[1，2]。骨关节炎的发生主要与细胞外基质丢失和大量纤维化形成而导致的软骨破裂有关，最终导致软骨总量的减少[3]。尽管临床上某些药物可通过减轻软骨退变和滑膜炎症来减轻骨关节炎症状，但由于该病发病机制复杂，目前尚无有效的治疗方法。最近的研究主要集中在软骨细胞凋亡的抑制上，以保持软骨功能和维持软骨细胞活性[4]。据报道，活性氧过度积累可促进骨关节炎的发展[5]。活性氧可诱发软骨细胞氧化应激反应和线粒体的损伤[6，7]，并激活内质网应激[4，8]，此外，氧化应激会破坏细胞膜并诱导细胞凋亡[9]。大量临床与基础研究表明抗氧化剂的应用可以发挥对骨关节炎的保护作用[10]。然而，许多抗氧化剂使用后常常产生严重不良反应，例如胃肠道出血、心脏或血管相关的疾病，这可能对患者的健康造成更大危害[11，12，13]。许多传统的中草药具有抗氧化、抗炎等作用，且不良反应少、成本低，目前已作为关节软骨治疗的替代品受到越来越多的关注[14，15] 紫檀芪(pterostilbene，PTE)是紫檀、蓝莓、葡萄和花榈木等中药植物的有效成分之一，是白藜芦醇衍生的非黄酮类多酚化合物。白藜芦醇是当今研究的热点化合物之一，因紫檀芪是白藜芦醇的衍生物，因此两者具有相似的药理特性。而有实验表明，在同等情况下紫檀芪的生物利用率、生物活性及安全性比白藜芦醇更高[16，17]，因此，紫檀芪较白藜芦醇可能更适于进一步开发并应用于临床。紫檀芪是一种强大的天然抗氧化剂，已有证明能降低细胞氧化应激和活性氧的发生，并抑制不同细胞系过氧化氢酶的表达增加[18]。虽然目前国内外对紫檀芪的抗氧化机制进行了广泛的研究，但是，关于紫檀芪在软骨细胞抗氧化应激作用中的研究还未见报道。实验旨在研究紫檀芪对H2O2诱导的人软骨细胞氧化应激损伤的影响，为今后深入探讨紫檀对软骨细胞的治疗作用提供依据。 1、材料和方法 设计 细胞学实验观察。 时间及地点 实验于2019年1月至9月在广西医科大学完成。 材料 取自无膝关节相关疾病、无污染，因车祸在广西医科大学创伤骨科手外科截肢患者，标本获取均得到患者知情同意，并取得广西医科大学第一附属医院伦理委员会批准，批号。 、试剂及仪器 紫檀芪(成都曼斯特科技有限公司)；Ⅱ型胶原酶、二甲基亚砜(Sigma，美国)；1%青-链霉素(索莱宝，北京，中国)；体积分数10%胎牛血清(Hyclone，美国)；高糖培养基(DMEM)、MTT溶液(Gibco，美国)；MultiskanGO酶标仪(ThermoFishecientific，USA)；苏木精和伊红染色、番红O染色试剂盒(索莱宝)；荧光素二乙酸盐(FDA，InvitrogenLifeTechnologies，美国)；碘化丙锭(PI，Invitrogen，美国)；激光扫描共聚焦显微镜(NikonAmericaInc，美国)；倒置显微镜(OLYMPUS，日本) 实验方法 将在无菌条件下将膝关节软骨剪碎成小块，在37℃下用2g/LII型胶原酶消化4h。收集消化的细胞，离心并重悬于含1%青-链霉素和体积分数10%胎牛血清的高糖培养基，于体积分数5%CO2，37℃培养箱中培养。待软骨细胞铺满培养皿表面至80%-90%，以1∶3传代，取第2代软骨细胞开始用于后续实验。 为了确定紫檀芪的最佳浓度，将软骨细胞接种于96孔板(2000个细胞/孔)，待