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冰冻切片免疫组化步骤 1. 需要准备的材料 APES包被的载玻片 PBS() 4^多聚甲醛 PBST Tween-20 (含 ) PBST-G( L 含 甘氨酸) 2. 冰冻切片 取出组织块放于软塑料盖或特制的小盒内，之后将其缓慢平放于盛有液氮的小杯内，让盒底 部接触液氮(小盒及组织块切勿浸入液氮内)，大约10-20秒组织即迅速冰冻成块。取出组织冰块立 即置于-80C 冰箱储存备用，或置于恒温切片机冰冻切片。 切片厚度4-8 um (5um)，对于免疫组化的需要用APES包被的载玻片，以增加组织片的粘附 性。 切片后如不立即染色，必须吹干，储存于低温冰箱内保存。 3. 免疫组化染色步骤 固定：取出切片，室温放置5min 。用4%1 勺多聚甲醛PBS溶液室温固定15min PBS, 冲洗 三次(冲洗可以采用侧斜淋洗，也可至于平皿中摇晃)。 打孔：如果是需要染细胞内的蛋白，用曲拉通(TritonX-100 )打孔：组织样品浸于含% TritonX-100 PBS 10min PBS 3 5min 的 中 ,之后用 洗 次，每次 。如果是染膜蛋白的，不需要曲 拉通打孔。 1%BSA PBST 30min 封闭：将组织置于含 勺 溶液中 ，封闭非特异性粘合的抗体。对于多聚甲 醛固定并进行免疫荧光的样本，在封闭缓冲液中加入 L的甘氨酸。 1%BSA PBST 1h 4C 孵化：组织样本浸于一抗（用含 勺 稀释），放于湿盒中，室温 或 过夜。 用PBS 3次，每次5mins。 1%BSA PBST 1h PBS 3 5mins 浸入二抗（ 勺 溶液），室温 。 次，每次 。 mL DAPI Hoechst 1min PBS 染色：浸入 的 或 中，染色 , 淋洗三次。 4 -20C 封片：用盖玻片封片，指甲油固定，保存与 或 。