毛细管电泳分离技术.ppt

毛细管电泳分离技术 一、毛细管电泳的原理 二、分离模式 三、检测 四、毛细管电泳的应用 一、毛细管电泳的原理 1.基本结构  2.原理 是经典电泳技术与现代微柱分离相结合的产物.是离子或荷电粒子以电场为驱动力,在毛细管中按其淌度或/和分配系数不同进行高效,快速分离的一种电泳新技术. 电泳淌度：单位场强下离子的平均电泳速度。因为电泳速度与外加电 场强度有关，所以，在电泳中常用淌度而不用速度来描述荷电粒子的电泳行为和特性。 3.特点 由于毛细管具有良好的散热效能,允许在窄内径毛细管两端加上高达30kV的高电压,分离毛细管的纵向电场强度可达400V/cm以上,可以在很短的时间内达到很高的分离效率,具有以下特点: (1)分离速度快(高压,高电场强度)在3.1min内分离36种无机及有机阴离子,4.1min内分离了24种阳离子(2)分离效率高(3)运行成本低 (4)样品与试剂消耗量少(1~50nL)(5)可供选择的分离模式多,应用范围广 (6)分离一般在水溶液介质中进行 (7)方法简单,仪器自动化程度高 (8)环境污染小 二、分离模式 1 毛细管区带电泳 2 胶束电动色谱 3 毛细管凝胶电泳 4 毛细管等速电泳 5 毛细管等电聚焦 6 毛细管电色谱 2、 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 3、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE 4 、毛细管等速电泳capillary isotachophoresis;CITP 分离是建立在试样中各组分的电泳淌度不同，等速电泳中被分析试样进样前后分别使用前导电解质溶液和终结电解质溶液，分离后的各组分区带以相同的电泳迁移速度通过检测窗口。 5、毛细管等电聚焦 capillary isoelectric focusing，CIEF 6、毛细管电渗色谱 capillary electroosmostic chromatography ，CEC 1.阴离子分析 2.药物分析 3.手性化合物分析 4.氨基酸与蛋白质分析 蛋白质分析 5.核酸分析及DNA排序 6.新进展 检测体液或细胞中某些代谢产物的分析； 尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段； 采用毛细管区带电泳方式，在11min内分离17种药物； 采用MEKC模式，鉴定违禁药物；效果优于HPLC法 合成获得单一手性化合物相当困难；528种手性合成药物，61中以单一对映体形式销售，其他为外消旋体；检测分析也相当困难；研究热点； R-反应停是安眠药，S-式致胎儿畸形； HPCE分离分析手性化合物的方法：加入手性选择剂； 形成配合物的稳定常数有差异，结合HPCE的高效率； 常用手性选择剂：环糊精及其衍生物；手性冠醚；手性表面活性剂（氨基酸衍生物、胆酸钠、牛磺脱氧胆酸及其钠盐、低聚糖等天然手性表面活性剂） 采用MEKC模式，在25分钟内分离了23种丹酰化氨基酸； HPCE可取代传统的氨基酸分析仪； 酶解的双螺旋DNA限制性片段的分离； 1.微型化 整体化学分析系统（TAS）及TAS微型化 在硅片上光刻出矩形槽作为毛细管，理论塔板数105/m； 2.联用仪器 CE-MS； 3.阵列毛细管凝胶电泳 应用于人类基因DNA测序； 5～10万个基因，30亿个碱基对，目前最有效的DNA序列分析仪，10小时/次；可同时电泳24个样品；速度1200碱基对/小时，提高速度！ 100支毛细管阵列电泳；速度280碱基对/小时/支 荷电粒子带电，包括电子、正电子、带电介子、质子或其他离子；非荷电粒子不带电，包括X射线、γ射线和中子。荷电粒子和非荷电粒子都可以是致电离辐射但电离方式略有不同。带有电荷的原子或分子，或组合在一起的原子或分子团。带正电荷的离子称“正离子”，带负电荷的离子称“负离子”。质子(proton)是一种带 1.6 × 10-19 库仑(C)正电荷的亚原子粒子， . 血红蛋白变异体.血红蛋白变异体 electroosmosis 流体动力学进样 也称为虹吸进样、压差进样 方法:毛细管进样端插入试样溶液容器，通过进样端加压，或检测端出口减压，或调节进样端试样溶液液面大于出口端缓冲液液面高度，利用虹吸现象，使进样口端与出口端形成正压差，并维持一定时间，试样在压差作用下进入毛细管进样端，再把进样端放回缓冲液液槽中，进行电泳 4. 进