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选修 3《现代Th物科技专题》知识点总结
专题
专题 1
基因工程
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA 重组和转基因技术,赋予Th物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的Th物类型和Th物产品。基因工程是在DNA 分子水平上进行设计和施工的,又叫做 DNA 重组技术。
操作水平:DNA 分子水平原理:基因重组
优点:1.突破物种界限 2.定向改造Th物的遗传特性
(一)基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)
来源:主要是从原核Th物中分离纯化出来的。
功能:能够识别特定的核苷酸序列,并在特定的切点切割,因此具有专一性。
作用的化学键:切割磷酸二酯键
(4)结果:经限制酶切割产Th的DNA 片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。2.“分子缝合针”——DNA 连接酶
(1)作用:将两个具有相同粘性末端的DNA 片段连接起来,形成重组DNA
连接的化学键:磷酸二酯键
与 DNA 聚合酶作用的异同:
DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA 连接酶是连接两个DNA 片段的末端,形成磷酸二酯键。
DNA 连接酶 DNA 聚合酶
不同点 连接的 DNA 模板
连接的对象
相同点 作用实质
双 链 不要模板
2 个 DNA 片段
单链 要模板
单个脱氧核苷酸添加到已存在的单链DNA 片段上
形成磷酸二酯键
化学本质 蛋白质
3.“分子运输车”——运载体
载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA 片段插入。
③具有标记基因,供重组DNA 的鉴定和选择。
最常用的载体是质粒,它是一种环状 DNA 分子。
其它载体:噬菌体、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序
第一步:目的基因的获取
从基因文库中获取(不知道目的基因的核苷酸序列的情况下采用)
人工合成。常用方法有:(1)反转录法(已经获得mRNA 的情况下采用)
(2)化学合成法(知道目的基因的核苷酸序列、基因比较小的情况下采用) 3.PCR 技术扩增目的基因(知道目的基因两端的核苷酸序列、基因比较大的情况下采用)
PCR 的含义:是一项在Th物体外复制特定DNA 片段的核酸合成技术。
目的:获取大量的目的基因
原理:DNA 双链复制
过程:第一步:变性,加热至 90~95℃DNA 解链为单链;(高温解旋) 第二步:复性,冷却到 55~60℃,引物与两条单链DNA 结合;
第三步:延伸,加热至 70~75℃,热稳定 DNA 聚合酶从引物起始进行互补链的合成。
特点:指数(2n)形式扩增
第二步:基因表达载体的构建(核心)
目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。
组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因
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启动子:是一段有特殊结构的DNA 片段,位于基因的首端,是RNA 聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录 mRNA。
终止子:也是一段有特殊结构的DNA 片段 ,位于基因的尾端,使转录停止。
标记基因的作用:鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗Th素基因。
第三步:将目的基因导入受体细胞_
转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
常用的转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 农杆菌转化法,其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是 显微注射技术。方法的受体细胞多是 受精卵。
将目的基因导入微Th物细胞:感受态细胞法:用 Ca2+ 处理细胞
(使其成为 感受态细胞 ,再将 重组表达载体 DNA 分子 溶于缓冲液中与感受态细胞
混
合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA 分子,完成转化过程) 原核Th物作为受体细胞的优点: 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少
第四步:目的基因的检测和表达
首先要检测转基因Th物的染色体DNA 上是否插入了目的基因,方法是采用DNA 分子杂交(DNA-DNA)技术。
其次还要检测目的基因是否转录出mRNA,方法是采用分子杂交(DNA-RNA)技术。
最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是采用抗原—抗体杂交技术。
有时还需进行个体Th物学水平的鉴定。如Th物抗虫或抗病的鉴定等。
(三)基因工程的应用基因工程的应用
植物基因工程:抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质。
动物基因工程:提高动物Th长速度;改善畜产品品质;用转基因动物Th产药物:如乳腺Th物反
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