分子生物学实验技术.ppt

分子生物学实验技术;核酸和蛋白质的基本性质 及实验操作注意事项;一、核酸的基本性质;核酸的组成;核 酸;DNA的一级结构;DNA 序列;DNA分子一级结构中的显著特点，顾名思义，就是脱氧核糖了。也就是核糖的２’位上没有自由羟基．这也就是DNA这一主要遗传物质极其稳定的根本原因。特别是对于碱的抵抗力，在pH１１．5时，DNA链的一级结构几乎没有任何变化，而RNA链在几分钟内降解为2’单磷酸核苷和3’单磷酸核苷。RNA碱水解先生成一个2，3环式单核苷酸中间产物，由于是一个五员环，稳定性较差，很快转变成2单核苷酸和3单核苷酸.;一、核酸杂交的基本理论 －－DNA的变性和复性;（1）主链脱氧核糖和磷酸基通过3，5磷酸二酯键交互连接，成为螺旋链的骨架。;碱基位于双螺旋的内侧， 磷酸和核糖在外侧， 通过3’，5’－磷酸二酯键构成骨架。 碱基平面与纵轴垂直， 糖环平面与纵轴平行。 大沟：宽1.2nm，深0.85nm，小沟：宽0.6nm，深0.75nm。;双螺旋的直径为2nm， 碱基堆积距离为0.34nm， 两个核苷酸之间的夹角36°， 每圈螺旋含10个核苷酸，螺距3.4nm。;二、决定双螺旋结构状态的因素 1．氢键： 在每一个碱基上都有适于形成氢键的供氢体如氨基和羟基以及受氢体如酮基和亚氨基。 （Tm为溶解温度）