分子生物学真核生物表达系统.ppt

外源基因在真核细胞中的表达;第一节 概述;1、真核蛋白在原核宿主中不稳定 2、表达出来的蛋白质不能有效、正确的折叠及二硫键配对错误 3、缺乏信号肽切除、糖基化、磷酸化和羧化等翻译后修饰以及对原核细胞有毒性。;一、真核细胞表达宿主的种类及优势;二、真核细胞表达外源基因的意义;外源基因导入真核细胞的基本方法;三、外源基因在真核细胞中表达的主要方式;五、外源基因在真核细胞中表达产物的鉴定和纯化; 哺乳动物细胞表达系统 ; 但该表达系统的表达水平较低、培养基昂贵、生长缓慢、含有过敏物质等缺点在实际应用过程中较难避免。哺乳动物细胞表达系统通常用来生产用常规方法无法获得的真核细胞蛋白。如EPO，TNF受体，基因工程单抗等。 CHO（中国仓鼠卵巢）是目前重组糖蛋白生产的首选体系。 ;哺乳动物细胞表达体系的优点;实例：组织血纤维蛋白溶酶原激活因子(tPA)、红细胞生成素(EPO)、人DNA酶。在大肠杆菌中表达tPA时，产生错折叠和非糖基化，而在酵母中表达tPA产生过糖基化，二者的产物都没有生物活性。 ;分泌型哺乳动物细胞表达系统;分泌蛋白新生肽链N端的一段20～30氨基酸残基组成的肽段。将分泌蛋白引导进入内质网，同时这个肽段被切除。现这一概念已扩大到决定新生肽链在细胞中的定位或决定某些氨基酸残基修饰的一些肽段。 ;Date;第二节外源基因在哺乳动物细胞中表达;