基因克隆操作过程.pptVIP

试剂的质量 所用的试剂，如CaCl2 等均需是最高纯度的，并用超纯水配制（过滤除菌，非高压灭菌），最好分装保存于干燥的冷暗处（冰箱4℃）。 防止杂菌和杂DNA的污染 整个操作过程均应在无菌条件下进行, 所用器皿 如离心管、枪头等最好是新的，并经高压灭菌处理。所有的试剂都要灭菌，且注意防止被其它试剂、DNA酶或杂DNA所污染, 否则均会影响转化效率或杂DNA的转入, 为以后的筛选和鉴定带来不必要的麻烦。  第三十张，课件共五十一张，编辑于2022年5月 （2）细菌原生质体的转化 适用对象：革兰氏阳性细菌（如枯草杆菌、链霉菌等），其接纳外源DNA的主要屏障是细胞壁，因而这类细菌通常去除细胞壁后再进行转化，这与酵母菌、霉菌、植物细胞等类似。 细菌原生质体的制备：不同细菌的原生质体制备方法不尽相同。以链霉菌为例，细菌需生长在高渗培养基中（如34%的蔗糖溶液，并加入甘氨酸以增加细菌细胞壁对溶菌酶的敏感性。在制备过程中，菌体应始终悬浮在10.3%的蔗糖等渗溶液中。与原生质体接触的所有器皿应保持无水、无去污剂。 细菌原生质体的转化：由PEG和Ca2+介导 细菌原生质体的再生：原生质体再生的主要目的是使细菌重新长出细胞壁。再生在特殊的固体培养基上进行，内含脯氨酸和微量元素。 第三十一张，课件共五十一张，编辑于2022年5月 （3）λ噬菌体DNA的转染