DB15∕T 2530-2022 奶牛产后子宫内膜炎早期诊断技术规范.docxVIP

ICS 65.020.30 CCS B44 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 2530—2022 奶牛产后子宫内膜炎早期诊断技术规范 Technical rules for early diagnosis of postpartum endometritis in dairy cows 2022-03-25发布 2022-04-25实施 DB15/T2530—2022 前??言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 I DB15/T 2530—2022 奶牛产后子宫内膜炎早期诊断技术规范 1 范围 本文件规定了奶牛产后子宫内膜炎的术语和定义、临床表现、检测方法和判定标准。 本文件适用于奶牛场以及畜牧工作者对奶牛产后子宫内膜炎的判定。 2 3 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 产后奶牛 postpartum cows 从分娩到胎衣排出的奶牛。 子宫内膜炎 endometritis 奶牛分娩和助产时由于产道受损、胎衣不下、子宫脱垂、流产、子宫复旧不全导致细菌感染而引起 的常见产科疾病。 干扰素-γ interferonγ 体内重要的细胞因子，通过调控免疫相关基因的转录协调机体的免疫反应，在诱导抗病毒反应、细 胞凋亡、抑制细胞增殖及免疫调节等方面具有重要的生物学作用。 4 临床表现 慢性子宫内膜炎，病牛全身症状不明显，从子宫流出透明的或带有絮状物的渗出物。 急性子宫内膜炎，病牛食欲不振，泌乳量降低，弓背努责，常作排尿姿势，从阴道排出粘液性或 污红色恶臭的渗出物，卧地时流出的量更多。 急性子宫内膜炎严重时，病牛体温升高，精神沉郁，食欲下降及产奶量明显下降，反刍减少。 5 诊断方法 1 DB15/T 2530—2022 诊断装置和诊断试剂 5.1.1 电子显微镜、超声影像仪、酶标仪（比色波长550 nm）、水浴箱（孵育温度为37℃）、台式 离心机、滴管、冰醋酸（AR级，乙酸含量99 %以上）、子宫内膜冲洗装置。 5.1.2 IL-2 ELISA试剂盒、IFN-γ ELISA试剂盒、载玻片、盖玻片、精密pH试纸。 5.1.3 95 %酒精、硝酸、33 %氢氧化钠、5 %硝酸银、吉姆萨染液、NO抗体、IL-2抗体和IFN-γ抗体。 样品采集 采集产犊后1～10 d内任何一天的奶牛血液10 mL、子宫颈粘液10 mL、恶露10 mL。 测定指标 NO、IL-2和IFN-γ。 测定步骤 5.4.1 子宫颈粘液中白细胞数量判定 滴1滴发情奶牛子宫颈口粘液于载玻片上，同时滴1滴95 %的乙醇加以固定。 滴1滴吉姆萨于载玻片上进行染色。 采用油镜检查5个视野后，对其100个细胞进行计数，计算白细胞总数。 5.4.2 恶露颜色判定 滴加0.5 mL硝酸于2 mL子宫内膜炎的恶露中，于沸水中煮沸1 min～2 min，取出冷却后，加入 1.5 mL 33 %的氢氧化钠溶液，混匀后观察颜色变化。 滴1滴恶露于精密pH试纸上，观察pH试纸变化情况。 5.4.3 血清NO测定 将奶牛血清与酶标板在37℃孵育90 min，洗板5次；加入抗牛NO抗体液孵育60 min，洗板5次；加 入预热后的ABC工作液孵育30 min，洗板5次；加入TMB显色液孵育30 min，加入TMB反应终止液；在酶标 仪550 nm处测吸光度值。根据标准曲线，计算得出血清中NO含量。 5.4.4 血清IL-2测定 将奶牛血清与酶标板在37℃孵育90 min，洗板5次；加入抗牛IL-2抗体液孵育60 min，洗板5次； 加入预热后的ABC工作液孵育30 min，洗板5次；加入TMB显色液孵育30 min，加入TMB反应终止液；在酶 标仪450 nm处测吸光度值。根据标准曲线，计算得出血清中IL-2含量。 5.4.5 血清IFN-γ测定 将奶牛血清与酶标板在37℃孵育90 min，洗板5次；加入抗牛IFN-γ抗体液孵育60 min，洗板5次； 加入预热后的ABC工作液孵育30 min，洗板5次；加入TMB显色液孵育30 min，加入TMB反应终止液；在酶 标仪450 nm处测吸光度值。根据标准曲线，计算得出血清中IFN-γ含量。 6 判定标准 子宫分泌物性状判定 2 DB15/T 2530—2022 奶牛子宫分泌物性状判定见表1。 表1 奶牛子宫分泌物性状判定 症状描述 判定 健康 无分泌物或清亮透明分泌物 黏液中有白色不透明物质或含有脓斑点 轻度子宫炎 黏脓性物质分泌物（≦50%脓性分泌物）并有恶臭味 黏脓性物质分泌物（≧50%脓性分泌物）并有恶臭味 中度子宫炎 中度子宫炎 子宫颈粘液中白细胞数量判定 奶牛子宫颈口粘液中的白细胞数量