基因工程原理测序技术.pptVIP

* 第六十三张，课件共八十八张，编辑于2022年5月 * 第三十一张，课件共八十八张，编辑于2022年5月 * 第三十二张，课件共八十八张，编辑于2022年5月 二、测序反应体系的组成 （二）引物 “通用”引物：在DNA聚合酶催化的测序反应中需要测序引物。不论是单链DNA模板，还是双链DNA模板，都可通过使用克隆位点两侧的载体序列互补的“通用”引物； 通用引物长度：一般为15～30个核苷酸。 * 第三十三张，课件共八十八张，编辑于2022年5月 二、测序反应体系的组成 （三）DNA聚合酶 1．大肠杆菌DNA聚合酶I大片段（Klenow片段）： Sanger法最早使用的酶，具有5’→3’聚合酶和3’→5’外切酶活性，催化链延伸反应的能力较差，用它进行测序常产生较高的本底和假带； 2．测序酶（sequenase）：经过修饰的T7噬菌体DNA聚合酶，消除了3’→5’外切酶活性。酶活非常稳定，很高的链延伸能力和极快的聚合反应速度，测定较长DNA的首选酶； 3．Taq DNA聚合酶：PCR反应关键酶，在95℃的高温下保持稳定，可在高温下进行反应，该酶用于测序具有很好的链延伸性能，能克服富含GC序列的模板形成自身二级结构对测序的影响。 * 第三十四张，课件共八十八张，编辑于2022年5月 二、测序反应体系的组成 （四）放射性核素标记的dNTP α-32P-dNTP或α-35S-dNTP。目前