基因工程常规技术核酸提取纯化.pptVIP

* 第三十张，课件共七十一张，编辑于2022年5月 一些RNA分子，特别是mRNA，会在苯酚处理过程中被除去，但是绝大多数的RNA都和DNA一起保留在水溶液中。 最有效的除去RNA的方法： 使用核糖核酸酶，它能够迅速降解RNA分子，把它们变成单核苷酸 * 第三十一张，课件共七十一张，编辑于2022年5月 常用：无水乙醇、异丙醇 乙醇沉淀法的额外优点是将短链和单体核酸成分留在了溶液中。核糖核酸酶处理产生的核苷酸因此在这一步得到了去除。 （3）沉淀DNA * 第三十二张，课件共七十一张，编辑于2022年5月 * 第三十三张，课件共七十一张，编辑于2022年5月 * 第三十四张，课件共七十一张，编辑于2022年5月 一般过程及原理： 动物组织剪成小块，匀浆或置液氮中冻结后研磨成细粉末。 组织培养的细胞用胰酶消化松散后直接使用。 （1）组织粉碎 2. 哺乳动物细胞基因组DNA的抽提 * 第三十五张，课件共七十一张，编辑于2022年5月 0.5%SDS和0.1mg/ml蛋白酶K。50 oC温育。 （2）细胞裂解 （3）纯化DNA 用苯酚和酚-氯仿抽提除去蛋白质污染。 SDS是离子型去垢剂（detergent），可以使细胞膜崩解。 （5）除去RNA污染 RNase。 无水乙醇（可以加入1/10体积的3M乙酸铵辅助沉淀） 异丙醇 （4）沉淀DNA * 第三十六张，课件共七十一张，编