细胞的冻存和复苏.docxVIP

背景知识： 细胞培养的传代及平时维持过程中，在培养器具、培养液及各样准备工作方面都需大量的耗资，而且细胞一旦走开活体开始原代培养，它的各样生物特性都将渐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此实时进行细胞冻存十分必要。 细胞冻存及复苏的基来源则是慢冻快融，实考证明这样能够最大限度的保留细胞活力。当前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜(DMSO)作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上迟缓冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，进而减少由于冰晶形成造成的细胞损害。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样能够保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，防止由于迟缓融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损害。 细胞冻存 操作步骤： 配制含6-10%DMSO的10%小牛血清的冻存培养液，冰上预冷； 取对数生长久的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管； 离心500rpm，5min； 去除胰蛋白酶及旧的培养液，由慢至快，滴入配制好的冻存培养液，用吸管轻柔吹打使细胞平均（在冰上进行）；一般一个小方瓶冻一支或许一个10cm培养皿冻2支。 将细胞分装入冻存管中，每管1ml（若冻存多于1支，则每支要平均分装）； 在冻存管上注明细胞的名称，冻存时间及操作者； 7.冻存：放入装有异丙醇的程序降温盒中，-70℃冰