玉米谷蛋白水解物对乙醇诱导损伤LO2细胞的保护作用.docxVIP

玉米谷蛋白水解物对乙醇诱导损伤L02细胞 的保护作用 氧化应激是指在体内外有害因素刺激下，体内自由基增加或机体抗氧化保护能力减弱，导致氧化系统和抗氧化系统失衡 ］ O在此状态下，过多积累的活性氧 (reactiveoxygenspecies, ROS)会造成核酸、蛋白质和脂质 等生物大分子的损伤，进而可能导致慢性退行性疾病的发生 ［2-5］ o抗氧化剂可通过中和自由基、清除氧化剂或防止氧 化剂转变为毒性更强的化合物，减缓或抑制细胞损伤，到达 抗氧化的目的［6］。抗氧化剂又可分为人工合成抗氧化剂和 天然抗氧化剂。近几年来，因人工合成抗氧化剂的平安性受 到质疑，所以寻找来源平安的天然抗氧化剂具有必要性。 玉米蛋白粉是玉米湿法生产淀粉的主要副产物之一，其中玉 米谷蛋白含量占其总蛋白含量的22%左右［7］,玉米谷蛋白中 富含谷氨酰胺，谷氨酰胺是细胞增殖的主要能源，又是合成 体内极其重要的抗氧化剂一一还原型谷胱甘肽 (glutathione, GSH)的前体物质［8］。然而由于玉米谷蛋白 水溶性差等的原因，限制了其功能性的发挥和在食品工业中 的应用［7-9］。有研究［io-n］说明，通过蛋白酶水解的方式 可以改善蛋白质的溶解度。而目前有关玉米谷蛋白水解物 (cornglutenhydrolysate, CGH)的研究主要集中于水解物的 制备及其物性研究等方面。LI等［10］采用单酶水解玉米谷蛋 后的细胞存活率的趋势与本实验结果一致。 5CGH对乙醇损伤后L02细胞内ROS含量的调节作用ROS是细胞内氧分子结合电子后的产物，包括超氧阴离子、 H202和?0H等，在细胞中能与生物大分子结合，破坏其生 理活性，进而对细胞造成损伤。图4为不同浓度CGH作用L02 细胞后，细胞内ROS相对水平。 图4CGH对乙醇损伤后的L02细胞内ROS含量的影响Fig. 4EffectofCGHonR0ScontentinL02cellsafterethanoli njury 从图4中可以看出，与对照组相比，经4%乙醇诱导损伤后的 L02细胞中ROS含量显著提高(P0. 05),说明乙醇诱导氧化应 激导致LO2细胞内ROS含量大量积累。与损伤组相比，经不 同浓度CGH预处理后L02细胞内R0S含量显著下降(P0. 05) o CGH在25 u g/mL时对处理组细胞内ROS清除能力较损伤组提 高约3倍。 图5中的系列照片表示的是CGH在不同浓度下预处理L02细 胞后，用荧光倒置显微镜拍摄的细胞荧光照片。其中图5-a 为对照组，图5-b为4%乙醇诱导损伤组，图5-c?图5-e依 次为蛋白质量浓度为25、50、100 口 g/mLCGH预处理组。 a-对照；b-损伤;c-25 u g/mL 蛋白；d-50 u g/mL 蛋白； e-100 e g/mL 蛋白 图5L02荧光图片Fig.5L02celIfluoresencephotograph 从图5中可以看出，L02细胞经乙醇诱导损伤后，细胞内ROS 含量较高，荧光强度强。可能是乙醇进入L02细胞内，使细 胞内ROS含量增加进而导致细胞氧化损伤，当DCFH进入细 胞后，被细胞内ROS氧化成DCF,使细胞内荧光强度增强， ROS值变大。经不同浓度的CGH处理细胞，细胞内的荧光强 度均有所减弱。综合图4和图5可以看出，当CGH质量浓度 为25 口 g/mL时，ROS含量最低，荧光强度最弱。可能是低浓 度的CGH可以正向调节Nrf2通路，进而减少ROS的产生， 而高浓度的CGH会激活Nrf2通路的逆反响，削弱CGH对ROS 的清除能力。我们推测是CGH中含有一定量的谷氨酰胺，谷 氨酰胺能够通过调节Nrf2通路减轻因乙醇引起的细胞氧化 损伤，减少ROS的产生，进而保护细胞免受氧化应激损伤［16］。 WANG等［17］以玉米蛋白为原料，研究玉米蛋白对氧化损伤的 肝癌细胞的ROS清除能力的影响，发现玉米蛋白具有很好的 ROS清除能力。 2. 6CGH对L02细胞内SOD的影响超氧化物歧化酶(superoxidedismutase, SOD)在人体氧化和 抗氧化的平衡中起作用，可以通过清除过量的超氧阴离子自 由基来保护细胞［18］。图6为不同浓度CGH作用乙醇诱导损 伤的L02细胞后，细胞内SOD活力。 图6CGH对乙醇诱导损伤的L02细胞内SOD活力的影响 Fig. 6EffectofCGHonS0DactivityinL02cellsinjuredbyeth anol从图6中可以看出，L02细胞在经乙醇诱导损伤后，细胞内 SOD活力显著降低(P0. 05)。与氧化损伤组相比，CGH预处理 后再进行氧化损伤，测得的细胞内SOD活力得到显著提高 (P0. 05), CGH在50ug/mL时，使损伤的细胞内SOD活力提 高了 2