丙型肝炎检测.pptx

丙型肝炎检测;目前丙型肝炎检测; 一、 HCV抗体检测 二、 HCV抗原检测 三、 HCV核酸检测 四、 HCV基因型检测;丙型肝炎病毒抗体检测;一、抗?HCV检测的目的意义 1、 抗?HCV检测可用于诊断、血液筛查、流行病监 测等。 2、 以诊断为目的的检测是为了确定个体HCV感染 状况。 3、 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播 HCV,包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4、 以流行病监测为目的的检测是为了解不同人群 HCV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、 重点人群和一般人群。;二、抗?HCV检测的方法 ???抗?HCV检测分为筛查试验（酶联免疫吸附 试验、胶体金法快速试验、化学发光试验、 免疫荧光试验）和补充试验（免疫印迹试 验）。;（一）筛查试验;2、化学发光试验;（2）化学发光酶免疫分析法：从标记免疫分析角度，化学 发光酶免疫分析（CLEIA）应属酶免疫分析，只是反应的 底物是发光剂，操作步骤与ELISA分析完全相同。以酶 标记生物活性物质（如酶标记的抗原或抗体）进行免痘 反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信 号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。 该方法又分为如下几类： ① HRP （辣根过氧化物酶）标记的CLEIA：常用的底 物为鲁米诺或其衍生物如异鲁米诺。是一类重要的发光 试剂。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，在过氧 化物酶及活性氧（过氧化阴离子02-，单线态氧。2,羟自 由基0H.，过氧化氢电。2）存在下生成激发态中间体，当 其回到基态时发光，其波长为425nmo早期用鲁米诺直 接标记抗原或抗体，但标记后发光强度降低而使灵敏度 收到影响。近来用过氧化物酶标记抗体，进行免疫反应 后利用鲁米诺作为发光底物，在过氧化物酶和起动发光 试剂（职0电电。2）作用下，鲁米诺发光，发光强度依 赖于酶免疫反应物中酶的浓度。;② 增强发光酶免疫分析(enhanced luminescence enzyme immunoassayELEIA) 在发光系统中加入增强发光剂以增强发光信 号，并在较长时间内保持稳定，便于重复 测量，从而提高分析灵敏度和准确性。 ③ ALP (辣根过氧化物酶)标记的CLEIA 所用底物为环1, 22二氧乙烷衍生物，用于 化学发光酶免分析底物而设计的分子结构中 包含起稳定作用的基团一金刚烷基，其分子 中发光基团为芳香基团和酶作用的基团，在 酶及起动发晃试剂作用下引血化学发光。;3胶体金法快速试验 (1) 免疫渗滤试验：斑点免疫胶体金快速试验以 硝酸纤维膜为载体，HCV抗原点状固定在膜上， 加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有 色斑点。反应时间在10分钟以内。有效试验的质 控点必须显色。 (2) 免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HCV 抗原线状固定在膜上，待检样品沿着固相载体迁 移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。 有效试验的质控线必须显色。;不觥;⑵临床诊断补充试验方法-2 此方法仅限于检测方法/试剂给出了特定阈值 （与抗体补充试验比较，其阳性的预测值 95%）时使用。高S/C。比值：当S/C。比 值2特定的阈值时；低S/C。比值：其S/CO 比值V特定的阈值。初筛和复检;初筛和复检均为阳性，且有样品0D值与临 界值(Cutoff)的比值(S/CO) 2试剂说明 书中给出的特定阈值，可报告“抗-HCV阳 性”，无需再做免疫印迹试验；否则，还 应进一步作免疫印迹试验。免疫印迹试验 结果阳性者，报告“抗?HCV阳性”；结果 不确定者，报告“抗?HCV不确定”并进行 随访。;4.检测结果的解释;（二）HCV抗原检测的方法 目前抗原检测ELISA试剂采用双抗体夹心 法定性或定量检测样品中游离的HCV核心 抗原（包括抗原抗体复合物和游离核心抗 原）。基本原理：以基因工程核心抗原免 疽小鼠后所获得的纯化抗-HCV核心抗原单 克隆抗体作为固相包被物，用与固相包被 物有不同抗原决定簇的抗-HCV核心抗原单 克隆抗体作为辣根过氧化物酶标记物，与 样品中总的或游离的HCV核心抗原反应， OPD显色后进行定性或定量测定。;? 大部分HCV抗原检测试剂检测的是样品 中游离核心抗原以及和抗-HCV结合的核心 抗原，因此在进行检测之前需要加入尿素、 盐酸及去垢剂等，以解离样品中的核心抗原 ■核心抗体免疫复合物。其它操作程序与一 般的ELISA或发光技术操作基本相同，艮卩： 第一步加入待测样品，孵育后，洗去未结 合的成分，加入酶标记或发光物质的抗核心 抗原的二抗，孵育后显色，再加入终止液 终止显色，用酶标仪比色计算s/c。值，来进 行阴性和阳性反应的判断。;将HCV抗原的标准物质稀释成不同浓度 的系列标准，还可进行HCV抗原的定量检 测。以辛黄坐标为HCV抗原的浓食;（三）检测策略及结果