酶固定化方法的研究进展1.docVIP

FILENAME chinese_format.doc PAGE - 酶固定化方法的研究进展1 张永刚1，李惠玲2，张浩勤1，万亚珍1 郑州大学化工学院，河南郑州 (450000） 摘 要：酶作为一种生物催化剂，对环境十分敏感，易受物理、化学和生物等因素的影响而失活，而且反应后混入产品，纯化困难，不能实现连续操作，这些难以克服的现象大大限制了酶促反应在工业中的应用，在这种条件下，固定化酶的概念和技术得以提出和发展。现如今，固定化酶技术已成为酶工程研究的重点和热点之一，该技术作为一种能有效提高生产效率的手段正引起人们的广泛重视.与游离酶相比，固定化酶有许多突出优点,尤其是稳定性和可重复使用性,使其在许多领域得到广泛应用。本文介绍了固定化酶制备的常用方法（吸附法、包埋法、共价法、交联法）以及各种各样的载体材料,同时对酶在一些性能优良的载体上的固定进行了综述。 关键词：酶 固定化 载体 中图分类号：TQ 1．引言 酶的化学本质是蛋白质，其催化作用具有高选择性、高催化活性、反应条件温和、环保无污染等特点。但游离状态的酶对热、强酸、强碱、高离子强度、有机溶剂等稳定性较差，易失活，并且反应后混入催化产物，分离纯化困难，不能重复使用。为了克服上述难题，在20世纪60年代发展起来了一项生物工程技术，叫固定化酶技术(Immobilized Enzyme)。所谓的酶固定化是指用固体材料将酶束缚或限制于一定区域内，进行其特有的催化反应，并可回收及重复利用的技术。该技术克服了自由酶的上述不足，提高了酶的储存稳定性，实现了重复使用及连续自动化生产，降低了成本，在生物工程、食品工业、医药和精细化学工业等领域有着广泛的应用前景。 2．酶的固定化方法 根据固定酶材料与酶分子之间结合力的不同，可分为化学法和物理法。化学法又可分为交联法和共价结合法。交联法需要双功能或多功能交联试剂，在酶分子和交联试剂之间形成共价键，从而把酶束缚在固体材料上。共价结合法是通过酶分子的非必须基团与载体表面的活性功能基团形成化学共价健实现不可逆结合的酶固定方法。化学法所得的固定化酶与载体连接牢固，有良好的稳定性及重复使用性，成为目前研究最为活跃的一类酶固定化方法。但该法较其它固定方法反应剧烈，固定化酶活性损失更加严重。 Katya Gabrovska等[1]用聚丙烯腈和壳聚糖的复合膜通过戊二醛交联固定脲酶，研究了不同壳聚糖质量分数的复合膜对固定化酶活性的影响，结果显示壳聚糖含量为0.25%时，固定酶的活性最高，是游离酶活性的95%。Gamze Durgun Altun等[2]用戊二醛在壳聚糖球珠上交联固定胃蛋白酶，研究了游离酶和固定酶在不同温度，pH值下的活性及热稳定性和储藏稳定性。Aziz Tanriseven等[3]用戊二醛活化明胶颗粒后固定葡萄糖淀粉酶，固定量85%，30天内保持全部活性，60天降到90%，90天降到75%。酶的最适温度，pH值不受固定化的影 1本课题得到国家自然科学基金和国家863计划(2008AA062330)的资助。 响。 物理法分为吸附法和包埋法。吸附法主要通过范德化力固定酶，把酶吸附在材料表面或内表面。 包埋法将酶限定在载体的网格中，从而实现酶固定化，适合小分子底物的催化反 应。两种固定化方法条件温和，酶的构象变化较小或基本不变，因此对酶的催化活性影响小，但酶和载体之间结合力弱，在不适pH、高盐浓度、高温等条件下，酶易从载体脱落并污染催化反应产物等。 Dumitriu等[4]将蛋白酶混于黄原胶溶液，再滴入壳聚糖溶液制备水凝胶实现固定化。Taqieddin等[5]将壳聚糖与藻酸盐混用制得微胶囊包埋β半乳糖酶。酶和细胞也可作为阴离子聚电解质直接滴入壳聚糖溶液制备凝胶珠实现固定化。此法操作简单方便，但两种电解质间静电引力较小，制得的壳聚糖凝胶机械强度弱，易裂解。顾旭炯等[6]以海藻酸钠为载体，用包埋法共固定α-淀粉酶和糖化酶双酶体系，研究了共固定化过程中双酶的比例、pH值、温度对共固定化后体系稳定性的影响，并探讨了此双酶体系在热稳定性、储藏稳定性、连续使用稳定性方面的效果。 潘晓榕等[7]采用吸附交联和包埋法对假单胞菌( Pseudomonas)CUY8产壳聚糖酶进行固定，并对游离壳聚糖酶和2种固定化酶的特性进行比较。游离壳聚糖酶的最佳pH值为5.0，最佳温度为55℃；采用吸附交联方法所获得的壳聚糖酶的最佳pH值为4.0，最佳温度65℃；采用包埋法获得的壳聚糖酶的最佳pH值为5.5，最佳温度为35℃。壳聚糖游离酶，吸附壳聚糖酶和交联壳聚糖酶的米氏常数依次分别为1.92mg/mL14.71mg/mL和5.91mg/mL；半衰期为18d，45d和37d。实验结