03 第三章 细胞生物学研究方法.pptVIP

二、 三、基因表达的定量分析常规方法：荧光实时定量PCR技术 聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR） 是模拟体内DNA复制条件，应用DNA聚合酶反应，特异性扩增某一DNA片段的技术。体外程序化的DNA合成技术。 Kary B. Mullis 反应体系： 模板DNA； 耐热的DNA聚合酶； 引物； 4种脱氧核苷酸（dNTP）； 反应缓冲液。 反应步骤： 95℃变性：DNA双链解离； (2)55℃退火：DNA链与引物 互补结合； (3)72℃延伸：DNA聚合酶作 用下的互补链 合成。 在PCR反应体系中加入荧光染料，能够产生荧光信号的扩增产物会随着PCR反应的进行而积累。荧光强度达到阈值才可以被检测，达到阈值时所完成的PCR反应循环个数称Ct值， Ct值与反应体系中模板中DNA片段的初始含量成正相关。 Ct 13.0 15.0 17.5 18.0 20.0 21.5 24.0 25.0 25.5 本章重点 光镜与电镜的区别 细胞培养 * ? * * * * * * * 20世纪60年代问世，用