基因工程载体质粒ppt课件.pptx

. 基 因 工 程 载体 南 京 农 业 大 学 陈 溥 言 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ . 概 述 基因工程是利用酶学方法将不同来源的DNA或cDNA，在体外切割、修饰、连接插入到不同目的的基因工程载体中，进行扩增和表达，研究基因结构和功能，基因和蛋白质关系的一种分子生物学技术。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ . 载体 基因工程的十分重要的工具。载体DNA分子中是有一段生长扩增的非必需区，该区经人工改造后可插入外源的DNA，并可送入宿主细胞中，使外源DNA与载体DNA重组并共同扩增。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ . 目前的载体主要有： 1,质粒（Plasmid）载体2,入噬菌体3,柯斯质粒（Cosmid）4,M13噬菌体5,杂交质粒6,病毒载体，包括穿梭载体（Shuttle ）。7,细菌人工染色体.(bacterial artificial chromosome，Shizuya，1992 BAC)8,酵母人工染色体(yeast artificial chromosome，Merry，1983 YAC)9,来源于P1的细菌人工染色体（P1-derived artificial chromosome PAC, loannon，1994）、10,哺乳动物人工染色体（MAC，mamal artificial chromosome，Farr，1991）11,人类人工染色体（HAC，human artificial chromosome，Harrington,1997）12,植物人工染色体(PAC) 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ . 质 粒 载 体（Plasmid） 一词最早是由Lederberg，1952年提出的。是双链、闭环DNA复制子（replicon）,存在于细菌的细胞质中并独立于染色体之外,能自主复制的一类DNA。 酵母的杀伤质粒（Killer Plasmid）是例外,它是一种RNA复制子。根据导链霉菌中存在 线状质粒 。质粒是细菌复制所非必须的，也就是说细菌失去质粒后仍可正常生长繁殖。但质粒可以赋于寄主某种新的有利的表型。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ . 质粒载体 质粒DNA的一般特点： ① 质粒DNA可在宿主菌中自主复制，又是细菌复制非必须的。 ② 占总的基因组的1～3%。 ③ 所有原核生物都有质粒。 ④ 赋于细菌一种表型，是菌株特性不是菌种特性。 ⑤ 隐蔽质粒(Cryptic plasmid)。 ⑥ 质粒都是双链闭环DNA复制子，酵母的杀伤质粒例外(RNA)。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ . 质粒的一般生物学性质 1969年Rownd提出严紧型复制控制的质粒和松驰型控制的质粒。主要指在标准的培养基生长条件下，每个细菌中所含的质粒DNA的拷贝数多少划分的。严紧型质粒，一般分子量较高；每个寄主细胞中仅含10~60个拷贝的质粒；松驰型质粒,每个细菌中所含的质粒DNA的拷贝数高,一种质粒究竟属于严紧型还是松驰型并不是绝对的。往往与寄主状况有关。质粒的复制不仅受自身的制约，而且还受寄主菌的控制。氯霉素是蛋白质合成的抑制剂，一般在细菌生长的对数生长期后期(细菌达1×109细胞/mL)，加入氯霉素或壮观霉素，细菌染色体和严紧型质粒复制停止，而松驰型质粒经过10~12小时，每个细胞中可多达几百个，甚至几千个质粒。每个细胞中可达50%以上DNA是质粒DNA。 严紧型(Stringent plasmid)和松驰型(relaxed plasmid)质粒 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ . PUC质粒都属松驰型质粒。 PACYC184等质粒属严紧型质粒。 根据需要使用严紧型还是松驰型质粒,如果插入外源DNA较大,或其产量过高会产生对宿主菌新陈代谢有干扰作用时，常选用严紧型质粒。反之选用松驰型质粒。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ . 2. 质粒的不相容性(