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急性白血病免疫分型
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简介
白血病免疫分型是利用单克隆抗体(McAb)对骨髓或外周血中的白血病细胞进行免疫标记,检测其细胞膜及细胞浆抗原,分析其表型,以了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度,从而诊断白血病的类型。
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原理
造血细胞分化抗原:造血细胞分化过程中由细胞核内染色体上的基因编码的镶嵌蛋白, 存在于细胞表面和(或)细胞浆内,随着分化成熟过程不断发生改变。
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原理
造血细胞分化抗原出现、增多、减少或消失与造血细胞所属系列和分化程度密切相关,因而可作为鉴别和区分造血细胞的标记。
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原理
急性白血病细胞来自造血干/祖细胞的恶性克隆性增生,既保持造血细胞的部分性质,又有其独特的生物学和免疫学特性:
(1)急性白血病主要表现在骨髓或外周血中原始幼稚细胞显著增多,正常细胞成分受抑制,因此免疫分型表现在带有某种抗原标志的细胞比例异常增多或减少,例如T-ALL时的CD7+细胞远远超过正常人的30%,而CD13+/CD33+细胞的比例降低,并可能同时伴有CD34+、TdT+细胞的异常增多;
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(2)错位表达:即同一细胞出现异系列抗原混合表达,如AML细胞出现CD7、CD10抗原,ALL细胞出现CD33、CD14等;
(3)抗原非同步化表达:如CD34与分化成熟较晚期的抗原不应该同步表达,但白血病细胞有时会出现CD34/CD56、CD34/CD20等同时表达的异常现象;
(4)抗原丢失:如CD13、CD33是髓系最常见抗原,但少数AML却不表达或仅表达其中一项。
原理
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如何进行免疫分型
选择良好的设门方法:FSC/SSC设门法,CD45/SSC设门法;
目的:排除正常细胞的干扰,将不正常的细胞群孤立出来便于重点分析。
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CD45是所有白细胞的抗原,其表达量与细胞分化程度具有高度相关性,即细胞分化程度高的细胞,CD45表达量高;分化程度低的细胞,CD45表达量低。
CD45表达量在成熟淋巴细胞最高,单核细胞、粒细胞、早期造血细胞依次减弱。红细胞(中、晚幼红细胞、成熟红细胞)不表达CD45。
侧向角光散射(SSC)反映细胞的颗粒性,成熟粒细胞SSC最高,依次为单核细胞、淋巴细胞、早期造血细胞、红细胞。
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通过CD45/SSC散点图即可获得初步印象。若同时加上一个或二个以上其它单抗进行二、三色甚至四色分析,则很容易识别非正常细胞群的表型。
通常在CD45/SSC散点图上,白血病细胞群体多出现于由淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和红细胞围成的称为“白血病窗”的区域内。
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根据骨髓细胞CD45/SSC 图中分布情况设门圈定各类细胞
R1 门为成熟淋巴细胞
R2 门为正常单核细胞位置
R3 门正常粒细胞位置
R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置
R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置
R6 门为幼稚髓细胞出现位置
白血病细胞通常会在R4 R6 两门位置处出现
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正常骨髓经CD45/SSC射门的散点图
CD45/SSC 图中可见
CD45 强阳性SSC 低信号的细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体
中等强度的CD45 表达SSC 信号最强的细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体
CD45 表达与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体绿色细胞群体
CD45 阴性SSC 信号最低的有核红细胞和细胞碎片
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单克隆抗体的选择
白血病免疫分型时尽量选用系列特异性强的单抗作为一线单抗,目前较为公认系列特异性单抗有T系的CD3、CD2;B系的CD79a、CD22 、CD19和髓系的MPO、CD117、CD13等。一般说来胞浆比胞膜的标志特异性强。用这些特异性强的标志作为初筛,基本可确定T系、 B系或髓系,随后即以二线单抗(CD14,CD36,CD41,CD34,CyIg,SmIg等)做进一步的免疫分型,以确定最后亚型。
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各系列造血细胞表达的主要相关抗原:T淋巴细胞系:CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8;
B淋巴细胞系:CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD79;
粒、单核细胞系:CD11b/c,CD13,CD14,CD15,CD33、CD64
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