肝癌患者血浆RASSF1A异常甲基化检测的意义（医学论文资料）.doc

肝癌患者血浆RASSF1A异常甲基化检测的意义（医学论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“肿瘤学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文5903字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：肝癌患者血浆RASSF1A异常甲基化检测的意义 1 1对象和方法 2 文2：肝癌患者血浆RASSF1A异常甲基化检测的意义 5 1对象和方法 5 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 肝癌患者血浆RASSF1A异常甲基化检测的意义（医学论文资料） 文1：肝癌患者血浆RASSF1A异常甲基化检测的意义 0引言 发现相对特异性的肿瘤标志物，尤其是能够起到早期筛选作用的标志物，对提高包括HCC在内的肿瘤诊断及治疗效果具有重要意义. 肝癌组织中RASSF1A基因启动子区CpG岛异常高甲基化可达100％ 的检测结果［1-2］. 我们在前期研究肝癌组织标本中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的基础上，观察患者血浆中RASSF1A基因启动子区异常甲基化情况，以证实其在肝癌诊断中的作用。 1对象和方法 对象41例肝癌血浆全部收集自第四军医大学附属西京医院200310/200503手术治疗的患者，血浆于所有治疗未介入时采集，全部配对标本均经术后组织学证实为原发性肝细胞癌，其中男36例，女5例，全组平均年龄岁. 10例健康对照血浆来自健康献血者。 亚硫酸氢钠购自Sigma公司，DNA纯化试剂盒购自Promega公司. 引物由上海华大基因公司合成［3］，序列如表1所示。 方法 /中分化组及低分化组；肿瘤分期依照国际抗癌联盟TNM分期标准分为Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期二组，HBV感染判定参照临床标准；血浆AFP检测结果按＜400 ng/mL，≥400 ng/mL分二组；病灶情况、血管累及、转移及肝硬化按照术中记录判断.表1引物序列及PCR反应条件（略） DNA Blood Mini Kit(QIAGEN)说明书进行，每份样本采用800 μL血浆，提取产物分光光度计定量后-20℃保存。 (MSP)检测取5 μg血浆DNA，97℃变性6 min，加入亚硫酸氢钠（ mol/L）及对苯二酚（1 mmol/L）55℃处理16 h，结果参照Wizard DNA cleanup system（Promega）说明纯化，以NaOH（ mol/L）室温处理10 min，冰冷乙醇沉淀，重溶于去离子水，以亚硫酸氢钠处理的基因组DNA为底物，加入上述引物对，反应条件为： 95℃预变性15 min， 继以95℃（50 s）， 60℃（1 min），72℃（1 min）共35个循环，最后于72℃延伸10 min. 扩增产物以30 g/L琼脂糖凝胶电泳，FR200A型紫外凝胶成像仪观察结果并拍照。 统计学处理：采用SPSS 软件包进行χ2检验，P＜表示差异有统计学意义。 2结果 血浆RASSF1A基因异常甲基化检测采用MSP法对41例患者血浆进行RASSF1A基因呈现异常高甲基化检测，结果17例为阳性，占总体％，对照10份来自健康对照的血浆中无阳性结果（图1），说明相对于正常对照，肝癌患者血浆中异常高甲基化的游离RASSF1A基因与肝癌自身有关. 进一步将配对标本的MSP检测结果（已另文发表）对比后发现：血浆MSP检测结果阳性者全部为标本MSP阳性患者，符合率100％，血浆检测结果与其相应的肿瘤组织二者关系密切，说明血浆RASSF1A异常甲基化能较好的反应其肿瘤来源特异性。 统计分析按照表2中临床资料及血浆MSP检测结果，进行统计学处理发现，血浆RASSF1A基因异常甲基化与患者年龄、性别，血清AFP、HBV感染，以及肿瘤恶性程度、分期、病灶的大小、数目、侵犯及转移等均无关（），然而在AFP阴性（＜400 ng/mL）的10例患者中，有7例血浆MSP结果为阳性（表3）. 41例血浆标本中，AFP阳性率％（31/41），敏感性优于RASSF1A，但分组结果发现，在AFP检测阴性的血浆标本中RASSF1A异常甲基化阳性率达70％（7/10），提示血液循环DNA异常甲基化具有诊断学价值，如联合AFP阳性及RASSF1A异常甲基化阳性结果则可使诊断敏感性上升至％（38/41）.表2肝癌患者血浆游离RASSF1A异常甲基化检测结果分析（略） 3讨论 研究非侵入性肿瘤检测及筛选方法的肿瘤特异性标志物，是临床肿瘤研究的重点，在此的过程中，有实验注意到起源于肿瘤的核酸能够在患者血液循环中检测到，并因此循环核酸检测有望成为一种早期检查肿瘤的方法［3］. 然而基因突变、杂合性丢失等，在肿瘤