药敏试验的质量控制培训课件.ppt

试验操作 接种平板： 调整好浊度的菌悬液最好在15min内将无菌棉签浸取，同时在管壁上出去棉签上多余的液体 用拭子划线整个琼脂表面，接种于表面干燥的MHA平板上，每次旋转平板约60°，以确保每次接种均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈 盖子可半开3-5min，但不可超过15min，以便放置药敏纸片前，使琼脂吸收表面多余的水分 第二十九页，共六十页。 试验操作 放置纸片： 将预先设定好并已经平衡至温度的药敏纸片分置在已接种细菌的琼脂表面 每个纸片必须压下以确保与琼脂表面完全接触。无论是单独放置或使用纸片分配设备，纸片必须分布均匀，两纸片圆心的距离不少于24mm 最好在预期的产生小的抑菌环的纸片旁边放置产生大的抑菌环的纸片，以避免重叠区 纸片距离琼脂边缘的距离同样重要，如果太靠近边缘，抑菌环可能不完整，建议距离平板边缘15mm。 药敏纸片一旦与琼脂表面接触，就不可再移动 放置纸片后15min内倒置平板进行培养 第三十页，共六十页。 试验操作 孵育温度：（35 ±2）℃ 孵育条件：除嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌和链球菌外，孵育不需要CO2 CO2浓度变化会显著改变一些药物的抑菌环大小 孵育时间：16-18h 测试 苯唑西林或万古霉素对葡萄球菌属，或万古霉素对肠球菌属的敏感性，孵育时间必须达到24h 第三十一页，共六十页。 细菌 接种物准备方法 接种培养基 纸片数量 培养温度(℃) 5%CO2 培养时间（小时） 100mm 150mm 一般需氧菌 直接菌落悬浮法，生长法 MHA 5 12 35±2 不需要 16-18 肺炎链球菌和其他链球菌 直接菌落悬浮法 5%羊血MHA 4 9 35±2，不超过37 需要 20-24 流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌 直接菌落悬浮法 含SR158因子的HTM 4 9 35±2 需要 16-18 脑膜炎奈瑟菌 直接菌落悬浮法 5%羊血MHA 2 5 35±2，不超过37 需要 20-24 淋病奈瑟菌 直接菌落悬浮法 GC琼脂基质+1%规定的生长添加物 4 9 36±1，不超过37 需要 16-18 第三十二页，共六十页。 平板结果判读 培养后的平板观察 细菌的涂布是否满意 接种是否正确 产生的抑菌环是否均匀为圆形 菌苔是否融合生长 如果可见单个菌落，说明接种量过稀，必须重复试验 第三十三页，共六十页。 平板结果判读 测量方法： 用肉眼判读，测量完全抑制区的直径，包括纸片的直径 采用游标卡或尺子在培养基的背面测量 将培养基放在一个黑色不反光的背景上，并用反射光观察 如使用血平板，应除去盖子并用反射光照射，在琼脂的上方测量抑菌环 第三十四页，共六十页。 抑菌圈直径阅读—游标卡尺 第三十五页，共六十页。 抑菌圈直径阅读—直尺 第三十六页，共六十页。 平板结果判读 测量直径 没有肉眼可见的明显的生长区即可认为抑菌圈边缘。只能在放大镜下观察到的细小菌落忽略不计。 在一个明显抑菌环内有分散的菌落生长时，应该从原始菌落移种后重新测试。如分散的菌落依然在抑菌环内生长，则应测量无菌落的抑菌环内径。 变形杆菌属细菌可迁徙生长到某种抗菌药物抑菌环内，忽略明显的抑菌环内薄纱样迁徙生长。 测量血平板上的抑菌环时，测量的是生长抑菌圈，而不是溶血抑制圈。 测量含甲氧苄啶和磺胺类药物的抑菌圈时，忽略少量生长，测量比较明显的边缘，以确定抑菌环的直径。 第三十七页，共六十页。 细菌 药敏纸片 孵育时间 观察结果 金黄色葡萄球菌 苯唑西林和万古霉素 24h 用透射光（平板举向光源）来检查明显抑菌环内有无耐药菌落的少量生长，抑菌环内任何区域出现可辨别的生长都判为苯唑西林或万古霉素耐药 头孢西丁 16-18h 读取时使用反射光 葡萄球菌属 利奈唑胺 16-18h 读取直径是用透射光，抑菌环内任何区域出现可辨别的生长都判为耐药 肠球菌属 万古霉素 24h 用透射光仔细检查抑菌环内是否有菌落生长，出现任何菌落意味着耐药 第三十八页，共六十页。 第三十九页，共六十页。 第四十页，共六十页。 结果解释 根据CLSI推荐的判断标准，报告细菌对抗菌药物的敏感性 有判断标准：敏感、中介、耐药 只有敏感的折点：敏感 同属细菌不同种判断标准可能不同 第四十一页，共六十页。 不可能出现的药敏现象 金葡菌：青霉素 S, 苯唑西林 R，万古霉素 R 肠杆菌科细菌：第三代头孢菌素 R，第一、第二代头孢菌素 S 嗜麦芽窄食单胞菌：出现碳青霉烯类 S 第四十二页，共六十页。 药敏试验的质量控制 复旦大学附属华山医院抗生素研究所 叶信予 第一页，共六十页。 药敏试验质量控制的目的 保证细菌的鉴定和药敏结果在临床诊断和治疗中的准确性和可靠性 满足疾病诊断和治疗的要求， 实事求是地反映检验标本的客观存在 与国际资料具有可比性 第二页，共六十页。 室间质控（