PCR新冠核酸异常扩增曲线解析.ppt

新冠核酸异常扩增曲线解析 汇报人: 刀客特万 XX省人民医院检验科 2022年5月1日 万天河制作，搬运必究 前言 1 正常扩增曲线长解析 2 异常扩增曲线解析 3 4 目录 Contents 小结 1 前言 前言 实时荧光PCR技术是新冠病毒核酸检测的主要方法。每一个标本的检测结果都会以一张扩增曲线图呈现，需要我们的“专业慧眼”去辨析，判断出“阴性”还是“阳性”。在实际工作中，核酸扩增曲线并非次次“完美”，易受到多种因素影响。因此如何判读扩增曲线，对准确报告新冠核酸检测结果至关重要。 万天河制作，搬运必究 正常扩增曲线长解析 2 万天河制作，搬运必究 正常扩增曲线长解析 正常扩增曲线呈S型，分为基线期、指数起始期、指数扩增期和平台期，且要求拐点清楚，整体平行性好，基线平而无上扬现象。 异常扩增曲线解析 3 异常扩增曲线解析 异常扩增曲线是核酸检测人员最为头疼的问题。辨别扩增曲线形态、分析产生异常扩增曲线的原因是检测人员的必备技能。每一条扩增曲线的判读需要慧眼识别和经验处理。我们总结了检测过程中遇到过的异常扩增曲线，与大家进行分享。 1、内标扩增曲线异常 正常的内标扩增曲线是实验有效性的基础，可反映样本质量、抽提和扩增效率。 异常扩增曲线解析 【类型一】某标本内标无S型扩增曲线。 【类型二】外源性内标呈离散型曲线。 （2）原因分析： 1） 标本采样欠佳，没有刮取到足够的鼻咽部细胞。 2） 标本保存不当，核酸降解。 3）标本加错位置或漏加。 4）提取失败：裂解液未混匀（外源性内标）、提取仪故障等。 5）扩增失败：漏加反应液、模板加错孔位、混入抑制扩增反应的干扰物等。 （1）曲线特点： （3）解决方案 1) 重新采集样本。 2) 送检标本及时检测，室温放置不超过4h。 3) 按照规范化流程进行相关操作。 4) 定期对在岗人员进行操作考核。 【注】内标扩增曲线异常，则该批或相应标本结果无效，需重新采样或重新检测。 异常扩增曲线解析 2、基线设定不当的异常扩增曲线 （1）曲线特点：软件默认基线设定的扩增曲线呈波浪型，导致Ct值偏大，可能会被误判为阴性。 （2）原因分析：软件默认基线设定不准确造成扩增曲线异常。 （3）解决方案：根据检测试剂的要求设定适宜的基线。 异常扩增曲线解析 解析 （1）曲线特点：软件优化后扩增曲线向斜上方抬起，导致Ct减小，根据优化后扩增曲线会误判为阳性，但原始信号未有明显扩增。 （2）原因分析：软件自动基线优化不准确，可能会放大异常扩增曲线的信号。 （3）解决方案：查看原始曲线，对基线稍作调整。 【注】自动基线优化软件会放大单个异常扩增曲线，可根据原始曲线判断信号真假。 3、软件优化造成的异常扩增曲线 异常扩增曲线解析 （1）曲线特点：多个标本出现单靶标通道的扩增曲线翘尾。 （2）原因分析： a) 反应液配制后保存不当，如荧光探针断裂。 b) 存在阳性质控污染或者其他荧光物质污染。 c) 扩增试剂/耗材的批间差异导致非特异性扩增增加（如试剂更新后Mg2+浓度过高）。 4、多个标本单靶标通道翘尾 （3）解决方案： a) 按照说明书要求保存配制的扩增反应液。 b) 提取得到的核酸应及时进行后续处理，否则及时封盖，避免混入阳性质控或其他干扰物；实验室每天按时清洁消毒以消除潜在的干扰因素。 c) 试剂/耗材批号更换前应进行比对实验验证。 异常扩增曲线解析 （1）曲线特点：标本靶标通道呈低平且非典型S型扩增曲线，标本与弱阳性质控的荧光强度存在显著差异。 （2）原因分析： 1) 标本存在干扰物质。 2) 提取纯化不完全。 （3）解决方案：标本重新检测，必要时可使用不同的检测试剂进行确认。 【注】对疑似标本建议使用不同的检测试剂进行确认。在异常扩增曲线判断时，应根据整批标本的扩增情况（弱阳性质控扩增曲线）综合判断。 5、靶标通道呈低平S型曲线 异常扩增曲线解析 万天河制作，搬运必究 6、蒸发引起的异常扩增曲线 异常扩增曲线解析 万天河制作，搬运必究 6、蒸发引起的异常扩增曲线 异常扩增曲线解析 6、蒸发引起的异常扩增曲线 异常扩增曲线解析 7、气泡引起的异常扩增曲线 异常扩增曲线解析 7、气泡引起的异常扩增曲线 异常扩增曲线解析 8、锯齿型异常扩增曲线 气管插管拔管前后的护理 8、锯齿型异常扩增曲线 （1）曲线特点：所有通道的扩增曲线出现锯齿状。 （2）原因分析：扩增仪电压不稳、采光或者滤光片故障。 （3）解决方案：检查扩增仪电压和光路系统，及时排除硬件故障，防止后续检测的异常结果。若扩增仪故障严重影响扩增曲线判读时应重新检测。 万天河制作，搬运必究 4 小结 小结 新冠核酸检测过程中每一个环节的操作都有可能产生异常扩增曲线，干扰结果判读。检测人员在上岗前需完成操作培训和考核，在实际工作中严格遵循规范化流程，掌握专