间充质干细胞示踪剂以及免疫调节因子.docxVIP

随着细胞生物学的进步，细胞治疗作为一种新疗法或新药物登上历史舞台，其中间充质干 细胞治疗难治性疾病取得了显著进展。间充质干细胞能够释放细胞因子和外泌体，可以调控 免疫系统、定向迁移至受损组织并起到促进组织损伤修复的作用，目前在肠炎、糖尿病以 及移植物抗宿主反响等疾病的临床治疗中取得了良好效果。目前国际上公认的间充质干细 胞是一类具有克隆形成能力、能够多向分化并贴壁生长的细胞，至少具备三大分化能力， 即成骨、成软骨和成脂肪分化。间充质干细胞广泛分布在人体组织中，其中胎盘、脐带是间 充质干细胞最理想的来源，在采集过程不会对人体造成损伤，不存在伦理问题，并且获取 到的干细胞数量大。 间充质干细胞来源越来越丰富，不同来源的间充质干细胞必然存在差异，早在2007年 Friedman等研究发现骨髓间充质干细胞与脐带间充质干细胞分泌的细胞因子存在差异， 而这些差异是否影响临床应用还需要深入研究。 MSCs的别离与培养： ▲目前较常用Percoll （参考：1.073g/ml ）液和Ficoll（参考:L077g/ml）液进行密度梯 度离心，这种方法别离培养的MSCs大小均匀，纯度较高，因此被广泛采用。 ▲也有贴壁筛选法、流式细胞仪别离法、免疫磁珠别离法等常用的MSCs标志物： MSCs缺乏特异性的外表标志物额，目前对于MSCs的鉴定也主要是根据它的形态、功能 等，且不同来源的间充质干细胞的外表标志物也不尽相同。但有一个共识是MSCs不表达 造血细胞的外表标志，如CD34、CD45和CD14 ,也不表达与人白细胞抗原识别有关的共 刺激分子CD80、CD86和CD40及主要组织相容性复合物-口类分子。 MSCs通常具有间充质细胞的外表抗原特征及内皮细胞、上皮细胞、肌细胞的外表抗原等, 比方 CD105、CD73. CD44、CD90、CD71、CD271 等以及 IL-lr、IL-3r、il-4i等多 种生长因子和细胞因子的受体。 常用的MSCs示踪标记物GFP，转染了 GFP的MSCs移植给合适的宿主后可通过荧光显微镜进行追踪，需注意自 发荧光产生干扰。 DAPI :在免疫荧光显示细胞核时，DAPI通常可与Hoechst染料互换，然而DAPI却不 是活细胞的理想标记物，因为DAPI无法穿透完整的细胞膜，并且在高浓度时具有细胞毒性。 Brdu :是一种胸腺口密咤类似物，该分子可整合入新合成的DNA中，广泛作为细胞标记 物使用。 Edu :是一种新型的胸腺嘴咤类似物MSCs的多向分化潜能是使用其进行细胞治疗的理论基础。移植的MSCs除需保存标记 物外还应确定某一细胞标志物与该示踪标记物共定位于同一细胞内。 MSCs的免疫调节作用与其分泌的各种因子免疫调节因子：HGF、TGF-B1、PGE2、IDO 趋化因子：rantes. SDF-la、MIP-las MCP-1营养因子：HGF、NGF、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF ▲血管再生因子:VEGF165, FGF-2、EGF、PDGF-AA、PDGF-BB ▲抑制疤痕因子：HGF. FGF-2▲抗凋亡因子：VEGF165、FGF-2、HGF