红小豆锈病菌鉴定和越冬及侵染过程的研究.docxVIP

红小豆锈病菌判定和越冬及侵染过程的研究 红小豆锈病是红小豆生产中危害最为严重的病害之一，在我国各红小豆栽种 区内普遍发生，已严重影响红小豆的产量和品质。但有关红小豆锈病病原菌的种 类国内外存在分歧，对于黑龙江省红小豆锈病菌越冬和侵染过程等方面未见报道。 明确黑龙江省红小豆锈病菌的种类、越冬和侵染过程，能够为进一步展开红 小豆锈病菌生活史研究和红小豆锈病有关分子生物学研究以及病害防治确立基 础。因此，本研究利用形态学联合ITS序列剖析和特异性引物检测的方法，对黑 龙江省红小豆锈病菌进行了判定，并研究明确了不同越冬条件下的冬孢子的萌生 能力，察看了红小豆锈病菌夏孢子的侵染过程，取得了以下主要结果：1.采用单 孢子堆分别法获得一株红小豆锈病菌纯培养物ZXL01。 采用观察夏孢子芽孔数目、地点和冬孢子壁厚度等形态学特点联合 rDNA-ITS序列剖析的方法，对其进行判定。ZXL01夏孢子抽芽孔多为2个，位于 孢子赤道部位较远处，冬孢子壁厚度为2.9μm3.3μm。 在鉴于rDNA-ITS序列建立的系统发育树中，ZXL01菌株与两株豇豆单胞锈 菌（Uromycesvignae）的参比菌株（GenBank登录号：AB115718和AB115731） 在自举值99%相聚一群。用豇豆单胞锈菌的特异性引物UV-ITSF/R进行检测， ZXL01菌株可扩增出500bp左右的特点片段。 初步确定黑龙江省红小豆锈病菌为豇豆单胞锈菌。将ZXL01菌株的ITS序列 提交GenBank，获得其登录号为KM461700。 寄主范围测定结果表示ZXL01菌株的夏孢子只能侵染红小豆植株。推断 ZXL01菌株为豇豆单胞锈菌红小豆专化型。 2.测试了病菌冬孢子在冬季田间埋地下10cm、冬季室外悬挂、冬季室温、4℃ 冷藏室和-20℃冷冻室等5种条件下越冬后的萌生能力，结果表示在5种条件储 存240d后冬孢子均可萌生，但萌生率差别较大，其中4℃和-20℃越冬办理冬孢子萌生率高达35%以上，说明红小豆锈菌能够冬孢子形态在黑龙江越冬。明确了冬孢子的最适萌生条件为27℃、全黑暗培养。 夏孢子侵染过程的察看表示，接种后6h，夏孢子即可萌生，并在气孔上方形成附着胞侵入寄主；接种后24h，产生气孔下囊和初级侵染菌丝，初级侵染菌丝在靠近叶肉细胞时形成吸器母细胞；接种后48h，可察看到胞内吸器以及次级侵染菌丝的形成；接种后5d，在侵染点周围可见显然的菌落，叶片出现褪绿黄斑；接种后8d，叶片内产生新鲜的夏孢子，叶片的正面和背面均形成大量夏孢子堆。