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关于常见问题分析及解决策略 第1页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期三 PCR技术简介 PCR常见问题、原因分析及其解决方案 提高PCR反应特异性的策略 临床PCR检测的常见问题 定量PCR常见问题 第2页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期三 PCR标准反应体系 DNA模板 引物 反应缓冲液 Mg 2＋浓度 dNTPs dH2O 耐热聚合酶 第3页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期三 反应体系对PCR扩增的影响 DNA模板 纯 度 蛋白、多糖、酚类等杂质会抑制PCR反应 完整性 模板降解会导致PCR扩增无产物 浓 度 加量过多导致非特异性扩增增加 引 物 特异性 长度适当、避免二级结构和二聚体 完整性 避免反复冻融 浓 度 应适当,过高导致非特异性增加, 过低则扩增产物 太少 第4页，共27页，2022年，5月20日，13点29分，星期三 反应体系对PCR扩增的影响 过高非特异性严重 过低无扩增产物 浓度适当 避免反复冻融 pH值适当 避免污染 pH值,盐离子浓度 稳定剂,增强剂 反应缓冲液 dNTPs dH2O Mg 2＋浓度 第5页，共27页，2022年，5月20日，1