分析化学液相色谱法.pptxVIP

分析化学液相色谱法会计学第1页/共17页（一）分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的 吸附能力差异而实现分离（二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺第2页/共17页1. 硅胶（SiO2·H2O）结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 特性： 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 吸附活性次序：活泼型束缚型游离型 2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力适用：分析酸性或中性物质 第3页/共17页续前2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5适于分析酸性、中性物质3. 聚酰胺 氢键作用 氢键能力↑强，组分越后出柱 第4页/共17页（三）吸附剂和流动相的选择： 依据被测组分、吸附剂和流动相的性质1. 被测组分性质（极性大小）： 烃＜ - - - - - - - - ＜羧酸，醇 2. 吸附剂的活性： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂3. 流动相的极性： 流动相极性↑大，对被测组分的洗脱能力↑大 “相似相溶”原则 ：根据组分性质、吸附剂的活性， 选择适当极性的流动相续前第5页/共17页4. 三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性第6页/共17页二、薄层色谱法（一）概述（二）定性参数（三）吸附剂的选择 （四）展开剂的选择 （五）薄层板的制备（六）定性与定量分析第7页/共17页（一）概述1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法2．操作过程：见图示铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量)3．分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻）4．特点：分析快速、灵敏、显色方便5．应用：药物杂质检查、纯度测定next第8页/共17页图示第9页/共17页图示L0L2L1第10页/共17页（二）定性参数1. 比移值Rf第11页/共17页续前讨论 Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为续前第12页/共17页 1）K↑大，Rf↓小 2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） 3）Rf范围：0 Rf 1 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离） Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳）第13页/共17页续前2. 相对比移值Rs 讨论参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性；参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1第14页/共17页（三）吸附剂的选择 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强——弱极性吸附剂 被测物极性弱——强极性吸附剂（四）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相的选择） 根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性硅胶G——自含粘和剂硅胶H——不含粘和剂，铺板时另加入CMC硅胶FH254——含荧光剂，254nm紫外光照发绿光硅胶FH365——含荧光剂，365nm紫外光照发光第15页/共17页（五）薄层板的制备定性分析——窄条定量分析——10×20cm（六）定性与定量分析 定性分析——日光，紫外光，显色 定量分析——洗脱法，薄层扫描法第16页/共17页四、纸色谱法将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液-液分配色谱法固定相：纸纤维吸附的水流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇）分离机制：同液-液分配色谱定性参数：讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分→易保留，Rf 小（流动相极性↑， Rf ↑） 非极性组分→易流出，Rf大（流动相极性↑，Rf ↓）