基因术及文献解读终.pptx

大家好，欢迎大家参加解螺旋周文献精读科研直播讲座，本期给大家带来的是;CRSPR-Cas9是一种由RNA介导的，能对人和其它物种基因组的特定位点进行精准编辑的技术。使用该技术能够进行细胞水平和动物水平的单基因或多基因的组成型、条件性、组织特异性敲除或定点突变。 ;CRISPR-Cas9与ZNFTALEN技术比较;CRISPR-Cas9发现和发展历程;CRISPR-Cas9的结构及作用机制;CRISPR-Cas9系统的功能;CRISPR-Cas9应用实例;CRISPR-Cas9应用实例;CRISPR-Cas9应用实例;CRISPR-Cas9应用实例;基因编辑技术的研究策略;利用CRISPR-Cas9技术敲除非编码基因;miR-21敲除策略;缺陷型细胞miR-21表达水平明显下降;缺陷型细胞UCA1基因表达水平明显下降;改进方案：双sgRNA编辑策略基因编辑效率要明显优于相对单sgRNA编辑策略;抑制DNA修复机制中的非同源修复机制能提高CRISPR/Cas9编辑效率;全文总结;CRISPR/Cas9编辑miR-155抑制促炎细胞因子的产生;miR-155敲除策略;图ab表示利用CRISPR技术敲除miR-155后，miR-155在细胞系中的表达情况； 图cd表示miR-155的靶基因——SHIP基因mRNA表达水平和WESTERN BLOT结果。;图a、b、c、d表示缺陷型细胞在内毒素、干扰素等诱导条件下，TNF-a、IL-6等炎性因子的产量显著下降； 图e、f表示在RANKL的诱导条件下，TRAP的活性显著上升。;全文总结;5`外显子突变常会产生保留部分功能的框内突变，遗传相关性很可能会被掩盖。;小鼠急性髓系白血病细胞中阴性对照实验;CRISPR-Cas9会产生很多的无效突变，大量的阴性选择可用于推断蛋白质不同结构域的功能重要性。; 对小鼠急性髓系白血病细胞的192个染色质调节性区域进行了筛选，发现了6个已知的药物靶点和19个潜在药物靶点。;图a.32 Ezh2 sgRNAs阴性实验评价 图b-j. 5 外显子突变阴性选择实验评价 图k-o. CRISPR-Cas9靶向的 Ezh2 and Dot1l不同结构域深度测序分析 ;综上所述，应用CRISPR-Cas9技术靶向编码蛋白功能结构域的外显子对其进行突变，可对维持癌细胞生长存活及发育等过程具有重要作用的蛋白及结构域进行大规模筛选，对于寻找合适的药物作用靶点，开发癌症治疗药物具有重要意义。 ;扫描二维码，获得本次讲座课件