分子生物学常用仪器介绍.pptxVIP

Biometra梯度PCR仪;工作原理;主要用途;Mullis开车的时候, 瞬间感觉两排路灯就是DNA的两条链，自己的车和对面开来的车象是DNA聚合酶，面对面地合成着DNA， ……;PCR仪的应用领域;医学领域;PCR具有极高的灵敏度;PCR仪器的变迁;PCR仪的种类;PCR仪的主要参数;现在的PCR仪如ABI，Eppendorf的一般具有两种温控模式，即模块温控模式（Block-control）和反应管温控模式）（tube-control）。 模块温控模式适用于长时间的静态孵育（如连接、酶切、去磷酸化等）。 试管温控更为准确 ;梯度PCR仪 ;原位PCR扩增 ;多槽式高通量PCR仪 ;仪器的功能性和人性化设计;样品基座——PCR反应多在或者的管子中进行，多数PCR仪也配备了不同的可更换样品槽适配不同的样品管。 eppendorf有一个有趣的设计，一个槽内带有和两种不同样品孔，不需更换基座就可以分别使用两种不同的反应管 ABI的9700就可以更换不同的样品槽 ;软件——新的PCR仪都比较注重程序编写的简易性。大屏幕，显示实时信息，倒计时，记忆存储多个程序、自动断电保护等都有助于实验室中的复杂环境使用。 ;Biophotometer生物分光光度计;技术参数 ;Biophotometer 生物分光光度计使用常见问答;答：DNA 的在Biophotometer 上能测定的最高浓度并 没有一个绝对的值，这是因为这个浓度跟使用的比色皿光程和样品的稀释比例有关的。 Biophotometer 测定的最大吸光度是。 当测定的DNA 样品吸光度大于时，建议采用2 mm 的比色皿光程替代10 mm。 10 mm光程下测定的A260=2.5 时，相当于125 μg/ml 浓度的双链DNA，1.25 μg/ml 的1:10 稀释。 如果是在2 mm 光程6.25 μg/ml 的1:10 稀释。 ;答：Biophotometer 在260 nm 下能够测定的最小吸光度是，这个吸光度值相当于浓度为2.5 μg/ml 的双链DNA 的吸光度（约125 ng 双链DNA 溶解在50 μl 溶液中），请确保核酸样品的吸光度必需大于，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值。 ;答：Biophotometer 在260 nm 下能够测定的最小吸光度是，这个吸光度值相当于浓度为2 μg/ml 的RNA的吸光度（约100 ng 双链DNA 溶解在50 μl 溶液中），请确保核酸样品的吸光度必需大于，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质???颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值。 ;答：请检查以下操作中的细节是否有所注意： 1－ DNA 样品的A260 吸光度值是否。请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值） 2－ 待测样品是否经过了充分的混匀，这样才能保证测定值的均一 3－ 待测样品中有相当含量的杂质。A260/A280 和260/A230是DNA 纯度的指示值，纯度好的DNA，在下其比值应该在2.0 或，A230 是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A280 是蛋白质的吸光度 ;答：产生四个加号的原因是因为测量的数值超过了测量上限，请检查 1－ 比色皿是否被完全压入比色皿槽内，出现加号有可能是比色皿的基座挡住了光线的通路。 2－ 您使用的比色皿的中心高度是否在8.5 mm ？ 3－ 比色皿中是否加入了足够量的空白对照溶液？ ;答：A230 产生负值主要是由于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。 在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230 的负值会被校正。 同时需要注意的是A260 的读数也必需大于0.1 才能保证可靠的结果。 ;答：Bradford 方法中使用的试剂在和塑料长期接触后会使塑料发生损伤，这种试剂不可以在塑料比色皿中放置超过5 分钟，测定值的波动是由于试剂与塑料表面发生反应后，导致吸光度发生变化而产生的，在使用这个方法时，建议使用玻璃比色皿。 ;核酸与蛋白的电泳分析;电泳槽;垂直电泳系统;凝胶浓度选择;电泳缓冲液 ;核酸电泳的指示剂;载样缓冲液;核酸电泳的染色剂;蛋白电泳的染色剂;溴化乙锭（ethidium bromide，EB） 是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光 可在凝胶电泳液中加入终浓度为的EB，有时亦可在电泳后，将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10～15min 琼脂糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，其DNA量一般5ng 溴化乙锭太多，凝胶染色过深，核酸电泳带看不清时，可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察;银